HPLC測定白頭翁藥材中白頭翁皂苷B4的含量
發(fā)布時間:2019-08-26 來源: 短文摘抄 點擊:
摘要 目的:建立白頭翁藥材白頭翁皂苷B4的含量測定方法。方法:運用高效液相色譜法測定,色譜柱為Inertsil ODS-3 C18(5μm 250×4.6mm),流動相為乙腈-0.1%磷酸溶液(29:71),流速0.8ml·min-1,柱溫為常溫;檢測波長203nm。結(jié)果:白頭翁皂苷B?4在0.60~7.2μg之間線性關(guān)系良好,r=0.9 999。平均回收率為98.5%,RSD小于2.0%。結(jié)論:本法方便、準確、靈敏、重復(fù)性好,可以用于白頭翁藥材的質(zhì)量控制。?
關(guān)鍵詞 白頭翁 白頭翁皂苷B4含量測定 高效液相色譜法??
白頭翁為毛莨科植物白頭翁pulsatilla chinensis(Bge.)Regel的干燥根。味苦,寒,歸胃、大腸經(jīng)。白頭翁始載于《本經(jīng)》具有清熱解毒,涼血止痢之功效,可用于熱毒血痢,陰癢帶下,阿米巴痢等[1、2]。其主要有效成分為皂苷類成分,白頭翁皂苷B4為其主要有效成分之一,其含量也較高[3],故建立高效液相色譜法對其含量進行測定,對白頭翁藥材或制劑的質(zhì)量標準研究具有很重要的意義。本實驗在確定了測定方法后,對白頭翁藥材中的白頭翁皂苷B4進行了含量測定。?
1 儀器與材料?
Waters高效液相色譜儀(515 HPLC Pump,Waters 2 478 Dualλ紫外檢測器,威馬龍色譜數(shù)據(jù)工作站);實驗用乙腈為色譜純,水為重蒸餾水;白頭翁皂苷B?4對照品購于長沙拓康生物制品有限公司(HPLC歸一法測定純度大于98%);白頭翁藥材均購于各藥材公司。?
2 方法與結(jié)果?
2.1 色譜條件與系統(tǒng)適用性試驗 色譜柱為Inertsil ODS-3 C18(5μm 250×4.6mm);流動相為乙腈-0.1%磷酸溶液(29:71);流速0.8ml·min-1;檢測波長203nm; 進樣量對照品、供試品分別進樣10μl、20ul;柱溫為常溫。在此色譜條件下,理論塔板數(shù)不小于3000,分離度大于1.5,峰形較好。對照品與樣品的色譜圖見附圖1?
附:HPLC測定白頭翁皂苷B4色譜圖
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2.2 對照品溶液制備 取白頭翁皂苷B4對照品6mg,精密稱定,加流動相溶解成每1ml含白頭翁皂苷B4對照品0.6 mg的溶液,作為對照品溶液。?
2.3 供試品溶液的制備 精密稱取白頭翁藥材粉末(過3號篩)0.2g,加甲醇10 ml,密塞,超聲處理30分鐘(功率150W頻率40KHz),放冷,濾過,取濾液1ml置蒸發(fā)皿中水浴揮干,放冷,加流動相轉(zhuǎn)移至10ml容量瓶中,用流動相稀釋至刻度,揺勻,過0.45μm濾膜,即得。?
2.4 線性關(guān)系考察 精密吸取白頭翁皂苷B4對照品溶液1.0、2.0、4.0、6.0、8.0、10.0、12.0、14.0μl注入液相色譜儀,測定峰面積,以白頭翁皂苷B4進樣量(μg)為橫坐標,峰面積為縱坐標,繪制標準曲線,其回歸方程為Y=?326 273.1 846X+7 558.5 482,r=0.9 999。結(jié)果表明白頭翁皂苷B4在0.60~7.2μg與峰面積呈良好的線性關(guān)系(數(shù)據(jù)見表1)。
2.5 精密度試驗 精密吸取白頭翁皂苷B?4對照品溶液10μl,重復(fù)進樣5次,記錄峰面積,結(jié)果精密度良好,RSD為0.80%(結(jié)果見表2)。?
2.6重復(fù)性試驗 精密稱取5份同一批藥材粉末(過3號篩)0.2g,同2.3項下方法制備供試品溶液,進樣分析,計算白頭翁皂苷B?4的含量,結(jié)果重復(fù)性良好,RSD為1.57% 。(結(jié)果見表3)??
2.7 穩(wěn)定性試驗 精密稱取白頭翁藥材粉末(過3號篩)0.2g, 同2.3項下方法制備供試品溶液,于0、1、2、4、6、8、12、24h分別進樣20μl分析,計算白頭翁皂苷B?4的含量,結(jié)果穩(wěn)定性良好,RSD為1.61%(結(jié)果見表4)。?
2.8 加樣回收率試驗 精密稱取同一批已知含量的白頭翁藥材粉末(過3號篩)0.1 g,共6份(分別按相當于藥材含量的80%、100%、120%加入白頭翁皂苷B?4對照品溶液) ,同2.3項下方法制備供試品溶液,分別進樣分析,由測得量與加入量計算回收率,結(jié)果表明回收率良好(結(jié)果見表5)。
2.9 樣品測定 對購買到的白頭翁藥材按供試品溶液制備項下方法制備樣品溶液,進樣分析,以外標法計算其含量(結(jié)果見表6)。?
3 討論?
3.1 提取條件的確定 實驗過程中比較了回流和超聲兩種常用方便的提取方法,超聲提取法明顯好于回流提取法(可能高溫的影響);對水、甲醇、70%乙醇、95%乙醇作為提取溶劑進行考察,結(jié)果甲醇好于其它溶劑。?
3.2 檢測波長的選取 經(jīng)用紫外分光光度法測定,白頭翁皂苷B4在202±1nm處有著最強吸收,經(jīng)高效液相色譜法測定,在波長203nm下效果較好,故選擇203nm為檢測波長。?
3.3 流動相組成的確定 在實驗過程中筆者考察過CH?3OH-H?2O(不同比例),CH?3OH-0.1%H?3PO?4(不同比例),CH?3CN-CH?3OH-H?2O(不同比例),CH?3CN-0.1%H?3PO?4(30:70),分離效果均不如CH?3CN-0.1%H?3PO?4(29:71)。?
3.4 因不同產(chǎn)地、不同采收時間、不同貯存時間長短有別,不同藥材的含量有一定的差異,須建立統(tǒng)一的有效成分含量測定標準。本實驗建立了白頭翁藥材中白頭翁皂苷B4的含量測定方法,為白頭翁藥材的質(zhì)量控制規(guī)范化和標準化提供了依據(jù)。?
參考文獻?
1 中國藥典[S],一部,2005:68.?
2 江蘇新中醫(yī)學(xué)院.中藥大辭典(上冊)[M].上海:上海科學(xué)技術(shù)出版社,1977:704.?
3 丁林生,唐元軍,王勇等.白頭翁湯有效成分檢查和測定[J].中成藥,1992,14(9);34.?
(收稿日期:2007年6月22日)
“本文中所涉及到的圖表、注解、公式等內(nèi)容請以PDF格式閱讀原文”
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