【摘要】 目的 采用HPLC法對湖南省4個產(chǎn)地絞股藍中人參皂苷Rb1含量進行測定。方法 采用甲醇回流提取，高效液相色譜法。色譜柱C18（Column 200×4.6mm，5μ），乙腈-0.5%磷酸（20：80）為流動相；檢測波長為203nm。結(jié)果 人參皂苷Rb1在0.515-5.665μg范圍呈良好的線性關(guān)系，r=0.9996；人參皂苷Rb1平均回收率：97.56%，RSD為1.05%。結(jié)論 該方法可靠、便捷，可以作為控制絞股藍藥材質(zhì)量的方法。同時，不同產(chǎn)地絞藍中總皂苷的含量存在差異，以湖南綏寧產(chǎn)絞股藍中總皂苷含量（0.53%）最高。
　　【關(guān)鍵詞】 絞股藍；人參皂苷Rb1；高效液相色譜法
　　文章編號：1004-7484（2013）-02-0557-02
　　絞股藍^[1-3]（Gynostemma pentaphyllum）為葫蘆科多年生草質(zhì)藤本植物，有“南方人參”和“第二人參”的美譽，別名小苦藥、公羅鍋底、五葉藤、遍地生根、甘茶蔓等。20世紀70年代末至80年代初期，日本著名的絞股藍研究專家永井正博等^[4]先后在絞股藍中發(fā)現(xiàn)了人參皂苷，并分離得到了80多種皂苷類物質(zhì)，確定其為四環(huán)三萜達瑪烷型結(jié)構(gòu)，其中4種皂苷與4種人參皂苷同物異名。已證明絞股藍具有減肥、降血脂、調(diào)血壓、延緩衰老、預防冠心病、抑制癌細胞、調(diào)節(jié)人體生理機能、增強機體免疫力等功能。2002年衛(wèi)生部將絞股藍列為新資源藥食同源保健品。絞股藍的黃酮、多糖、微量元素等都具有很好的保健功效，但其主要藥效成分是絞股藍皂苷。本文采用高效液相色譜法對絞股藍中人參皂苷Rb1的含量進行了測定，以期為絞股藍的應用提供一些依據(jù)。
　　1 儀器、試劑與藥材
　　LC-10A高效液相色譜儀（日本島津）；島津SPD-10A檢測器；N2000色譜工作站；HX-06型超聲波清洗器（武漢恒信世紀科技有限公司）；AE-240型電子天平（梅特勒-托利多（上海）有限公司）。人參皂苷Rb1購于中國藥品生物制品檢定研究院，批號：704-200114。甲醇、乙腈（色譜純試劑，天津科密歐化學試劑有限公司），水為重蒸餾水，其它試劑均為分析純（均為湖南匯虹試劑有限公司提供）。藥材采自湖南綏寧、桑植、瀏陽、平江，經(jīng)湖南省中醫(yī)藥研究院中藥研究所生藥研究室鑒定為為葫蘆科多年生草質(zhì)藤本植物。
　　2 方法與結(jié)果
　　2.1 色譜條件與系統(tǒng)適用性試驗 以十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑；乙腈-0.5%磷酸（20：80）為流動相；檢測波長為203nm；理論板數(shù)按人參皂苷Rb1峰計算不得低于5000。
　　2.2 對照品溶液的制備 精密稱取人參皂苷Rb15.15mg，置10ml量瓶中，加甲醇使溶解并稀釋至刻度，搖勻，即得。
　　2.3 供試品溶液的制備 取產(chǎn)自湖南綏寧絞股藍藥材粉末（過三號篩）約0.5g，精密稱定，置具塞錐形瓶中，精密加入甲醇25ml，稱定重量，加熱回流1小時，放冷，再稱定重量，用甲醇補足減失的重量，搖勻，濾過，取續(xù)濾液，即得。
　　2.4 線性關(guān)系考察 精密吸取人參皂苷Rb1（C=0.515mg/ml）對照品溶液1、3、5、7、9、11μl進樣，測定其峰面積積分值，以進樣量為橫坐標，峰面積積分值為縱坐標，繪制標準曲線，其回歸方程為：Y=45300x-652.28，r=0.9996。結(jié)果表明人參皂苷Rb1在0.515-5.665μg范圍內(nèi)具有良好的線性關(guān)系。
　　2.5 精密度試驗 取絞股藍藥材按供試品溶液的制備方法制成供試品溶液。精密吸取10μl，連續(xù)進樣6次，測定其峰面積，計算RSD為1.2%。
　　2.6 穩(wěn)定性試驗 取2.5項下的供試品溶液，精密吸取10μl，于0、4、8、12、24小時進樣，測定其峰面積。計算，RSD為1.6%，說明24h內(nèi)供試液穩(wěn)定性良好。
　　2.7 重復性試驗 取同一批藥材制成供試品溶液6份，測定含量。結(jié)果RSD1.6%，說明方法重復性好。
　　2.8 回收率試驗 精密稱取6份已知含量的本品0.3g，每份加入人參皂苷Rb1約1mg，按供試品測定項下測定。人參皂苷Rb1平均回收率為97.56%，RSD為1.05%。結(jié)果見表1。
　　2.9 樣品含量測定 取采自湖南綏寧、桑植、瀏陽、平江的絞股藍藥材，按供試品溶液的制備方法制備成供試液，分別精密吸取對照品溶液與供試品溶液各10μl，注入高效液相色譜儀，測定，計算，即得，結(jié)果見表2、圖1、圖2。
　　3 討論
　　3.1 絞股藍具有減肥、降血脂、調(diào)血壓、延緩衰老、預防冠心病、抑制癌細胞、調(diào)節(jié)人體生理機能、增強機體免疫力等功能，其中絞股藍皂苷是其主要藥效成分。目前對絞股藍的研究多數(shù)集中在絞股藍總皂苷上，其中人參皂苷Rb1是皂苷的主要成分之一，文獻報道，主要采用紫外分光光度法測定絞股藍總皂苷。我們選擇了人參皂苷Rb1作為絞股藍藥材含量控制指標，采用高效液相色譜法，經(jīng)方法學考察和湖南省4個不同產(chǎn)地絞股藍的測定，表明該方法可靠、便捷，可以作為控制絞股藍藥材的質(zhì)量方法。
　　3.2 絞股藍皂苷的含量與品種、產(chǎn)地氣候、土壤條件、采收時間、采樣部位等有很大關(guān)系，對湖南省4個不同產(chǎn)地的絞股藍全草進行測定，結(jié)果表明不同地區(qū)絞股藍的人參皂苷Rb1含量有較大差異，其中以湖南綏寧縣產(chǎn)質(zhì)量好。
　　參考文獻
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　　[3] 李金青，楊洪軍.絞股藍的藥理作用研究進展[J].中國現(xiàn)代藥物應用，2009，3（7）：189.
　　[4] 黃敏珠，王棟，尹忠臣，等.紫外分光光度法測定絞股藍中絞股藍總苷的含量[J].中國中藥雜志，2010，35（18）：2410.

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