基于入血成分的金鐵鎖藥材質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)研究
發(fā)布時(shí)間:2019-08-28 來(lái)源: 短文摘抄 點(diǎn)擊:
[摘要] 采用高效液相色譜法建立了金鐵鎖藥材中尿囊素的含量測(cè)定方法。金鐵鎖藥材經(jīng)乙醇提取后,取續(xù)濾液進(jìn)行分析。采用ZORBAX NH2色譜柱(4.6 mm × 150 mm,5 μm),檢測(cè)波長(zhǎng)220 nm,柱溫40 ℃,流動(dòng)相為乙腈-水(93∶7),流速1.0 mL·min-1。結(jié)果表明,尿囊素線性關(guān)系良好,具有較好的精密度和重復(fù)性。在0.010 4 ~ 0.166 g·L-1,尿囊素的線性相關(guān)系數(shù)R2=0.999 4(n=5);RSD(n=6)小于2.1%;平均回收率為95.47%~ 100.9%。該方法具有良好的靈敏度、回收率和重復(fù)性,可為金鐵鎖藥材的質(zhì)量控制提供參考。
[關(guān)鍵詞] 金鐵鎖;入血活性成分;尿囊素;高效液相色譜
中藥是一個(gè)復(fù)雜的化學(xué)體系,它對(duì)人體的作用通常也被認(rèn)為是多成分和多靶點(diǎn)綜合效應(yīng)的結(jié)果,因此中藥材的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)的制定與西藥有著跟本的區(qū)別。目前,從化學(xué)物質(zhì)基礎(chǔ)的角度來(lái)制定中藥材的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)方法主要有色譜法、光譜法以及質(zhì)譜法等。然而不管選取哪種方法作為中藥材的質(zhì)量控制方法,都必須先選擇好合適的對(duì)照品。通常對(duì)照品的選擇大部分都是藥材中含量相對(duì)較大的特征化合物或者是有效成分。前者雖然是中藥材中所含有的主要化合物,但是并不一定是中藥材發(fā)揮藥效作用的化合物,因此選擇這樣的化合物作為指標(biāo)性化合物制定的中藥材質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)不能從根本上控制中藥材的質(zhì)量。后者是中藥材中具有一定生物活性的化合物,用它來(lái)制定中藥村的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)有一定的理論意義和實(shí)踐意義。傳統(tǒng)中藥多為口服給藥,其有效物質(zhì)必須以血液為介質(zhì)輸送到靶點(diǎn),從而產(chǎn)生作用,因而給藥后的血清才是真正起作用的“制劑”,血清中含有的成分才是中藥的體內(nèi)直接作用物質(zhì),入血后的活性成分才是真正的有效成分[1-2]。
金鐵鎖Psammosilene tunicoides為石竹科金鐵鎖屬植物的干燥根,主要分布在貴州、云南、四川、西藏等中國(guó)西南地區(qū),是我國(guó)西南地區(qū)特有的單屬種植物,也是貴州民間常用藥物,現(xiàn)已作為稀有瀕危物種列于《中國(guó)植物紅皮書(shū)》中,屬國(guó)家二級(jí)保護(hù)植物。金鐵鎖以根入藥,具有散瘀定痛、止血、消癰排膿之功,用于跌打損傷、風(fēng)濕痛、胃氣痛、創(chuàng)傷出血等的治療[3-5]。
金鐵鎖被收錄于《中國(guó)藥典》2010年版中,但在該標(biāo)準(zhǔn)中沒(méi)有用其化學(xué)成分為指標(biāo)的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)項(xiàng)。本研究以金鐵鎖中的入血化學(xué)成分(尿囊素)為指標(biāo),建立了金鐵鎖藥材中尿囊素HPLC含量測(cè)定方法,該方法的精密度高,重復(fù)性好,穩(wěn)定性好,回收率高,測(cè)定結(jié)果準(zhǔn)確,可為控制金鐵鎖藥材的質(zhì)量提供科學(xué)依據(jù),同時(shí)為以化學(xué)成分為指標(biāo)的中藥材質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)的制定提供參考。
1 材料
高效液相色譜儀Ultimate300高效液相色譜儀(包括四元泵,在線脫氣機(jī),自動(dòng)進(jìn)樣器,二極管陣列檢測(cè)器,柱溫箱),1/10萬(wàn)電子天平(梅特勒-托利多儀器上海有限公司),KQ5200E型超聲波清洗(昆明市超聲儀器有限公司)。
色譜乙腈;水(重蒸水,臨用前制備);無(wú)水乙醇;尿囊素對(duì)照品(中國(guó)食品藥品檢定研究院,1501-200001);金鐵鎖藥材經(jīng)貴陽(yáng)中醫(yī)學(xué)院陳德媛教授鑒定為金鐵鎖P. tunicoides(6個(gè)不同產(chǎn)地)。
2 方法與結(jié)果
2.1 樣品前處理
2.1.1 血漿樣品前處理 取干燥、粉碎后的金鐵鎖藥材2.0 g,用30 mL 20%乙醇進(jìn)行超聲提取2次,合并提取液,減壓濃縮回收溶劑后得金鐵鎖提取物。取適量金鐵鎖提取物用水溶解,配成濃度為20 g·L-1的溶液,通過(guò)灌胃給藥方式給大鼠(210 g)金鐵鎖提取物水溶液3 mL,分別在10,30,60,120 min后對(duì)大鼠進(jìn)行采血,將血液離心后取上層血漿100 μL用乙腈沉淀蛋白,渦旋混勻后離心,將上層清液于氮吹儀上吹干,取93%乙腈100 μL進(jìn)行溶解,離心后待測(cè)?瞻籽獫{按同樣方法處理。
2.1.2 藥材前處理 取金鐵鎖藥材2.0 g,精密稱定,置具塞錐形瓶或三角瓶中,加入20%乙醇30 mL,稱定質(zhì)量,超聲提取40 min,補(bǔ)重后取續(xù)濾液進(jìn)行測(cè)定。
2.2 標(biāo)準(zhǔn)溶液的配制
精密稱取適量尿囊素對(duì)照品1.66 mg,加20%乙醇制成每1 mL含0.166 mg的標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備液,根據(jù)需要用20%乙醇稀釋成不同質(zhì)量濃度的標(biāo)準(zhǔn)工作液,即用即配。
2.3 高效液相色譜條件
ZORBAX NH2色譜柱(4.6 mm × 150 mm,5 μm);流動(dòng)相為乙腈-水(93∶7);流速1.0 mL·min-1;檢測(cè)波長(zhǎng)220 nm;柱溫40 ℃;進(jìn)樣量5 μL。
2.4 入血實(shí)驗(yàn)結(jié)果
將處理好的血漿樣品經(jīng)高效液相色譜儀測(cè)定,通過(guò)尿囊素對(duì)照品及空白血漿樣品的高效液相色譜圖的比較,確定尿囊素為金鐵鎖藥材中的1個(gè)入血化學(xué)成分,其結(jié)果見(jiàn)圖1。
2.5 提取條件的選擇
分別采用回流和超聲2種提取方式進(jìn)行提取,發(fā)現(xiàn)超聲提取效果較好。對(duì)不同濃度的乙醇以及溶劑用量、提取時(shí)間和次數(shù)進(jìn)行了考查,最終確定提取條件為30 mL 20%乙醇超聲提取40 min。
2.6 檢測(cè)波長(zhǎng)的選擇
根據(jù)文獻(xiàn)[6-7]以及多次實(shí)驗(yàn)考察,發(fā)現(xiàn)檢測(cè)波長(zhǎng)為220 nm時(shí)效果較好。
2.7 柱溫的選擇
考察了不同柱溫對(duì)尿囊素分離效果的影響,結(jié)果發(fā)現(xiàn),柱溫為40 ℃時(shí),峰形較好,分離度較好。
2.8 線性關(guān)系的考察
精密稱取經(jīng)五氧化二磷干燥至恒重的尿囊素1.66 mg于10 mL量瓶中,加20%乙醇配成0.166 g·L-1的對(duì)照品儲(chǔ)備液。分別制備得0.010 4,0.020 8,0.041 5,0.083,0.166 g·L-1 5個(gè)質(zhì)量濃度的溶液,分別精密吸取該對(duì)照品系列溶液各5 μL,注入高效液相色譜儀,按上述色譜條件進(jìn)行測(cè)定,并以對(duì)照品的峰面積(X)為橫坐標(biāo),濃度(g·L-1)Y為縱坐標(biāo),繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線,回歸方程Y=0.013 7X+0.001 2,R2=0.999 4(n=5),結(jié)果表明,尿囊素在0.104~1.66 mg線性關(guān)系良好。
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