HPLC法測定秋水仙藥材中秋水仙堿的含量
發(fā)布時(shí)間:2019-08-28 來源: 短文摘抄 點(diǎn)擊:
【摘要】目的:研究秋水仙藥材中秋水仙堿的提取分離及對秋水仙堿進(jìn)行質(zhì)量控制。方法:用0.03mol/L的鹽酸乙醇溶液提取藥材。色譜柱:Waters MS C18(4.6×250mm);流動相:甲醇-水(45∶55);檢測波長:353nm;流速:1.0ml/min。結(jié)果:能很好的將秋水仙堿分離出來,秋水仙堿在0.074~0.444mg/ml之間線性關(guān)系良好,r=0.9999;平均回收率為103.57%,RSD為4.58%。結(jié)論:本文使用用乙醇做提取溶劑,無毒性;含量測定方法操作簡單,結(jié)果準(zhǔn)確,重復(fù)性好,可用于秋水仙藥材的質(zhì)量控制。
【關(guān)鍵詞】維吾爾藥材秋水仙;秋水仙堿;質(zhì)量控制;含量測定
【中圖分類號】R284.1【文獻(xiàn)標(biāo)志碼】 A【文章編號】1007-8517(2014)17-0010-02
Abstract:
Keywords:
秋水仙為百合科植物秋水仙Colchicum autumnale L.的干燥鱗莖。為維吾爾藥常用藥材,維吾爾語稱“蘇潤江”。主產(chǎn)于歐洲,尤盛產(chǎn)于地中海和黑海沿岸,非洲和西亞、南亞等地亦有分布 ,目前多從巴基斯坦進(jìn)口。我國自七十年代起從國外引進(jìn)種子和球莖,分別在北京、廬山、昆明等地試種。
秋水仙被收載于《衛(wèi)生部藥品標(biāo)準(zhǔn)維吾爾藥分冊》,秋水仙堿作為秋水仙的主要化學(xué)成分,尚未建立含量測定方法。此次,作為國家藥品(維藥)標(biāo)準(zhǔn)提高研究課題,對原有的秋水仙標(biāo)準(zhǔn)進(jìn)行了修訂、提高,同時(shí),建立了秋水仙堿含量測定的方法。
1儀器與材料
1.1儀器Waters 2695高效液相色譜儀(美國Waters公司),Empower工作站(美國Waters公司);ZY012臺式電熱干燥箱;METTLER AE 200型電子分析天平(瑞士)。
1.2材料秋水仙堿(批號101176-201001,中國藥品生物制品檢定所)。甲醇為色譜純,水為去離子水,其余試劑均為分析純。10批秋水仙Colchicum autumnale L.供試品藥材分別從伊朗、巴基斯坦進(jìn)口,由新疆維吾爾藥業(yè)有限責(zé)任公司、新疆華康藥業(yè)股份有限公司提供。
2方法與結(jié)果
2.1秋水仙提取分離取秋水仙粉末(過3號篩)2g,精密稱定,置具塞錐形瓶中,精密加入0.03mol/L的鹽酸乙醇溶液(2.7→100)20ml,振蕩15min,放置24h,濾過,取續(xù)濾液,即得。
2.2秋水仙堿的含量測定
2.2.1色譜條件色譜柱:Waters MS C18(4.6×250mm);流動相:甲醇-水(45∶55);檢測波長:353nm;流速:1.0ml/min;柱溫:40℃;進(jìn)樣量:10μl 。在此色譜條件下,秋水仙堿峰型較好,并且能夠較好的分離。色譜圖見圖1。
2.2.2對照品溶液的制備取秋水仙堿對照品適量,精密稱定,加乙醇制成每1ml含24μg的溶液,搖勻,即得。
2.2.3供試品溶液的制備取本品粉末約1g,精密稱定,置具塞錐形瓶瓶中,精密加入0.03mol/L的鹽酸乙醇溶液(2.7→1000)20ml,振蕩15min(恒溫振蕩器;室溫;中等強(qiáng)度),放置24h,過0.45微孔濾膜,即得。
2.2.4線性關(guān)系考察精密稱取秋水仙堿6.17mg,置25ml容量瓶中,加入乙醇適量,溶解,并定容至刻度,搖勻,作為對照儲備液。精密量取上述儲備液3、6、9、12、15、18μl,注入高效液相色譜儀,照上述色譜條件測定峰面積。以秋水仙堿濃度為橫坐標(biāo),峰面積為縱坐標(biāo),得回歸方程Y=2446183.144X-18495.7333 (r=0.9999),結(jié)果表明,秋水仙堿量在0.074~0.444mg/ml之間線性關(guān)系良好。
2.2.5精密度實(shí)驗(yàn)吸取秋水仙堿對照品溶液10μl,在上述色譜條件下,連續(xù)進(jìn)樣6次,結(jié)果秋水仙堿峰面積RSD值為0.15%。
2.2.6重復(fù)性試驗(yàn)取秋水仙藥材6份,按供試品溶液的制備方法制得供試品,在相同的色譜條件下,連續(xù)進(jìn)6針,進(jìn)樣量10μl,依次測定。結(jié)果供試品中秋水仙的平均質(zhì)量分?jǐn)?shù)為0.04%,RSD為0.73%。
2.2.7穩(wěn)定性試驗(yàn)分別于0、4、8、12、24h后進(jìn)樣,共5次,結(jié)果秋水仙峰面積的 RSD值為0.56%。結(jié)果表明,供試品溶液室溫下24h內(nèi)穩(wěn)定。
2.2.8加樣回收試驗(yàn)精密稱取已測定的秋水仙藥材供試品6份,每份0.5g,另取0.2468mg/ml秋水仙堿對照品溶液1ml,因所用秋水仙對照品含量為93.0%,實(shí)際加入量為0.2295mg/ml,按供試品溶液制備方法同法操作,進(jìn)樣量10μl。結(jié)果秋水仙堿平均回收率為103.57%,RSD為4.58%。
2.2.9專屬性試驗(yàn)將制得的供試品溶液、空白溶液和秋水仙堿對照品溶液,依次進(jìn)樣,結(jié)果:空白溶液不干擾供試品中秋水仙堿的含量測定。
2.2.10供試品測定取不同產(chǎn)地、不同批次的秋水仙藥材供試品,按供試品制備方法處理,依次測定(n=10),結(jié)果見表1。
根據(jù)測定結(jié)果,秋水仙藥材的含量定為按干燥品計(jì)算,含秋水仙堿 (C22H25NO6)不得少于0.008%,納入標(biāo)準(zhǔn)。
3結(jié)論
秋水仙Colchicum autumnale L.的干燥鱗莖做為維吾爾常用藥材,一直被用來治療關(guān)節(jié)骨痛,肝炎,黃疸等疾病。秋水仙藥材中秋水仙堿的含量測定也曾有文章報(bào)導(dǎo)過,但其提取方法使用大量的三氯甲烷,毒性大,提取方式及含測方法都較為繁復(fù)。本文使用的含測方法,用乙醇做提取溶劑,無毒性,操作簡單,結(jié)果準(zhǔn)確,可用于秋水仙藥材的質(zhì)量控制。
參考文獻(xiàn)
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