[摘要] 目的 建立余甘子葉的指紋圖譜。 方法 采用高效液相色譜法測(cè)定，乙腈-0.1%磷酸溶液梯度洗脫，流速1.0 ml/min，柱溫25℃，紫外檢測(cè)波長(zhǎng)218 nm。 結(jié)果 余甘子葉中有15個(gè)共有峰被確定為指紋峰，采用《中藥色譜指紋圖譜相似度評(píng)價(jià)系統(tǒng)A版》計(jì)算機(jī)軟件評(píng)價(jià)10批余甘子葉指紋圖譜的相似性，其結(jié)果均>0.9。 結(jié)論 該方法簡(jiǎn)便，穩(wěn)定，精密度高，重現(xiàn)性好，可用于余甘子葉的鑒別，作為質(zhì)量控制方法。
　　[關(guān)鍵詞] 余甘子葉；高效液相色譜法；指紋圖譜
　　[中圖分類(lèi)號(hào)] R284.1[文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼] A[文章編號(hào)] 1674-4721（2014）06（b）-0011-04
　　
　　Study on HPLC fingerprint analysis of Phyllanthus emblica L.
　　MAO Jian1 LIU Zhen-jie2▲
　　1.Department of Clinical medicine,People′s Hospital of Fuchuan County in Hezhou City of Guangxi Zhuang Autonomous Region,Fuchuan 542700,China;2.Conservation Center,Guangxi Institute of Medicinal Plant,Guangxi Zhuang Autonomous Region,Nanning 530023,China
　　[Abstract] Objective To establish a method of fingerprint analysis on Phyllanthus emblica L. by HPLC. Methods The chromatographic finger-prints were obtained by HPLC.The detective wave-length was set at 218 nm;the flow rate was 1.0 ml/min and the column temperature was maintained at 25℃. Results 15 co-possessing peaks were selected as the fingerprint peaks of Phyllanthus emblica L. and good similarities with correlation coefficients higher than 0.9 were found in fingerprints between the different samples of Phyllanthus emblica L. and the standard fingerprint. Conclusion The method with good reproducibility is simple and accurate,it can be used as an effective quality control method for Phyllanthus emblica L.
　　[Key words] Phyllanthus emblica L.;High performance of liquid chromatography;Fingerprint
　　余甘子葉（Phyllanthus emblica L.）系大戟科（Euphorbiaceae）葉下珠屬（Phyllanthus）余甘子Phyllanthus emblical L.落葉小喬木或灌木的葉[1]，余甘子樹(shù)在我國(guó)資源豐富，收載于1978年版《藏藥標(biāo)準(zhǔn)》、1974年出版的《云南省藥品標(biāo)準(zhǔn)》和多版《中華人民共和國(guó)藥典》，別名有橄欖、滇橄欖、油甘子、山油甘、庵摩勒、牛甘子、喉甘子、楊甘等,余甘子果果實(shí)生食酸甜酥脆，初食味酸澀，后回味甘甜爽口，故名余甘[2]。余甘子味甘、酸、澀、性涼，具有化痰止咳，健胃消食，清熱生津，保肝解毒等功效[3]。主治感冒發(fā)熱、咳嗽、咽喉痛、白喉、煩熱口干、消化不良、腹痛、慢性肝炎、高血壓、肥胖癥、高脂血癥、濕熱性水腫、尿頻、血病、赤巴病、培根病、肝病、心臟病，以治療血熱血瘀引起的血病為長(zhǎng)[4]。近年研究表明余甘子具有抗菌[5]、抗腫瘤[6]、抗氧化[7]、抗動(dòng)脈粥樣硬化[8-9]、抗乙型肝炎病毒[10]、保肝[11]、增強(qiáng)免疫[12-13]等作用。余甘子有多種化學(xué)成分，藥理活性研究主要集中在多酚類(lèi)成分上，槲皮素、沒(méi)食子酸為其有效成分[14-15]。本實(shí)驗(yàn)對(duì)余甘子葉進(jìn)行指紋圖譜研究，以期對(duì)其質(zhì)量控制和評(píng)價(jià)提供有效方法。
　　1 實(shí)驗(yàn)材料
　　1.1 儀器
　　Agilent1100高效液相色譜儀；含在線真空脫氣機(jī)；高壓四元梯度泵；可變波長(zhǎng)檢測(cè)器；二極管陣列檢測(cè)器Agilent1100；Series色譜工作站（美國(guó)安捷倫科技公司）；SB3200T超聲波清洗儀（上海能信超聲有限公司）；BP211D電子分析天平（德國(guó)賽多利斯）。
　　1.2 試劑
　　甲醇、乙腈為色譜純，乙酸乙酯、磷酸及其他試劑均為分析純。水為超純水。槲皮素對(duì)照品和沒(méi)食子酸對(duì)照品由中國(guó)藥品生物制品檢定所提供（槲皮素對(duì)照品批號(hào)：110081-200406；沒(méi)食子酸對(duì)照品批號(hào)：110831-200302）。
　　1.3 藥材
　　實(shí)驗(yàn)所用余甘子葉藥材于廣西各地及云南玉溪收集，產(chǎn)地和采收時(shí)間見(jiàn)表1，經(jīng)廣西中醫(yī)學(xué)院藥用植物教研室劉壽養(yǎng)副教授鑒定為余甘子Phyllanthus emblica L.的干燥葉。
　　
　　表1 余甘子葉產(chǎn)地和批號(hào)
　　
　　
　　
　　
　　
　　
　　
　　
　　
　　
　　2 方法與結(jié)果
　　2.1 供試品溶液制備
　　取余甘子葉粗粉1.0 g，精密稱(chēng)定，置于具塞錐形瓶中，精密加甲醇25 ml，密塞，稱(chēng)重量。靜置1 h，超聲30 min后放冷，補(bǔ)重，濾過(guò)，精密量取續(xù)濾液20 ml，揮干，殘?jiān)��?5 ml水溶解至分液漏斗中，加入乙酸乙酯振搖提取3次，每次25 ml，合并乙酸乙酯液，蒸干，殘?jiān)�加甲醇使溶解，�?5 ml量瓶中，加甲醇稀釋至刻度，搖勻，離心，取上清液為供試品溶液。
　　2.2 提取溶劑的考察
　　比較水、無(wú)水乙醇、甲醇等提取溶劑，結(jié)果表明以甲醇、無(wú)水乙醇提取時(shí)，所得的色譜圖中的色譜峰數(shù)較多；余甘子葉的現(xiàn)代研究表明，沒(méi)食子酸和槲皮素為余甘子葉的有效成分，所以以其沒(méi)食子酸和槲皮素含量計(jì)算，用甲醇為溶劑，藥材中沒(méi)食子酸和槲皮素提取較完全[16]。經(jīng)綜合考慮，選定提取溶劑為甲醇。
　　2.3 超聲時(shí)間的考察
　　樣品分別超聲20、30、40 min，結(jié)果表明，超聲的時(shí)間為30 min以上，以其沒(méi)食子酸和槲皮素含量計(jì)算，藥材提取較完全。故選定提取時(shí)間為超聲30 min。
　　2.4 色譜條件
　　色譜柱：Thermo Hypersil BDS C18（5 μm，4.6 mm×250 mm）；流動(dòng)相為乙腈-0.1%磷酸，梯度洗脫（表2）；柱溫25℃；檢測(cè)波長(zhǎng)218 nm；進(jìn)樣量5 μl。
　　
　　表2 流動(dòng)相梯度洗脫程序
　　
　　
　　
　　
　　2.5 方法學(xué)考察
　　2.5.1 精密度試驗(yàn)取批號(hào)為200701藥材，制備供試品溶液，連續(xù)進(jìn)樣5次，各色譜峰的相對(duì)保留時(shí)間RSD<1.42%，相對(duì)峰面積RSD<2.94%，結(jié)果表明，儀器的精密度良好。

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