[摘 要]目的：改進(jìn)大黃酚與大黃素的測(cè)定方法。方法：通過甲醇提取與酸水解同步進(jìn)行，用高效液相色譜法簡(jiǎn)便、快捷、準(zhǔn)確地測(cè)定了多種藥材與制劑中大黃酚與大黃素含量。色譜條件為：sihmadzuvP一ODS C18l：（150mmx4.6mm，5μm）為色譜柱，甲醇一0.1%磷酸（85：15）為流動(dòng)相，流速：1.0mL·min-1，檢測(cè)波長(zhǎng)為254nm。結(jié)果：通過方法學(xué)考察，大黃酚的進(jìn)樣量在0.022一0.32μg（r=0.9999），大黃素的進(jìn)樣量在0.015一0.22μg（r=0.9999）范圍內(nèi)，呈良好的線性關(guān)系。大黃酚與大黃素的平均回收率（n=3）分別為96.10%一101.7%和96.75%一100.9%。結(jié)論：改進(jìn)方法檢測(cè)效率高，檢測(cè)成本低，環(huán)境污染輕。
　　[關(guān)鍵詞]藥材；制劑；大黃酚；大黃素；改建方法
　　中圖分類號(hào)：U879 文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼：A 文章編號(hào)：1009-914X（2016）10-0356-01
　　傳統(tǒng)大黃酚與大黃素含量測(cè)定所選用的方法比較煩瑣，也浪費(fèi)時(shí)間，同時(shí)還存在著比較大的誤差，因此需要對(duì)這兩種物質(zhì)含量測(cè)量進(jìn)行改進(jìn)，可以將甲醇、酸水等有機(jī)融合起來，不再進(jìn)行氯仿萃取、蒸干的環(huán)節(jié)，此種方法不僅簡(jiǎn)單，花費(fèi)的時(shí)間也比較少，同時(shí)還不會(huì)受到溫度等因素的干擾。大量的實(shí)踐證明，應(yīng)用改進(jìn)后的方法來對(duì)上述兩種物質(zhì)進(jìn)行含量測(cè)量，效果比較好，同時(shí)還能夠減少環(huán)境污染，為操作人員的生命健康也提供了一定的保證。
　　一、材料、儀器與試藥
　　痛風(fēng)舒片（批號(hào)：050401，0.49·片-1）、碧云砂乙肝膠囊（批號(hào)：050711，0.59·粒-1）由承德燕峰藥業(yè)股份有限公司提供；三黃片（批號(hào)：0505201，0.259·片-1）為河北省藥品檢驗(yàn)所留樣。藥用大黃（批號(hào)：120984一200301）、虎杖（批號(hào)：120980-200002）、決明子（批號(hào)：121011一20以03）藥材、大黃酚對(duì)照品（批號(hào)：96一200107）、大黃素對(duì)照藥品（批號(hào)：0756-200211）購(gòu)自中國(guó)藥品生物制品檢定所。日本島津LC一IOADvp泵；SPD一Ml0ADvp二極管陣列檢測(cè)器；CLASS一VP/LC色譜工作站；美國(guó)77251手動(dòng)進(jìn)樣器。美國(guó)Waters2695分離單元；Waters2487雙波長(zhǎng)紫外檢測(cè)器；Empower色一潛工作站。流動(dòng)相所用的試劑為色譜純，其他試劑、試藥均為分析純。
　　二、實(shí)驗(yàn)過程
　　1、溶液制備
　　1.1 制備對(duì)照品溶液
　　研究者要分別精確的稱取大黃酚與大黃素，充當(dāng)對(duì)照品，再分別的添加一定量的甲醇，制成為1ml中含有0.4mg的溶液，而后稱取溶液添加90%甲醇，而后分別制成8μg/ml的大黃酚溶液、4μg/ml的大黃素溶液。
　　1.2 制備供試品溶液
　　研究者選擇專門工具進(jìn)行準(zhǔn)備稱取，放入到塞三角瓶中，而后再添加甲醇與鹽酸，兩者之間的比例為10：1，溶液整體整體為25ml，精確稱取重量，將溶液放入到80℃的水浴中，待到半個(gè)小時(shí)后，再放冷，如果瓶壁中存在黏附現(xiàn)象，采用超聲去除，再使用甲醇補(bǔ)足，以此保證最終重量不會(huì)受到影響，而后搖晃均勻，過濾，再吸收2ml濾液，將其放入到10ml量瓶中，再添加氫氧化鈉大約2%，體積為1ml，再添加甲醇直到制定刻度，而后搖晃均勻，過濾，再取濾液就獲得了供試品溶液。
　　2、線性范圍
　　研究者選擇精密儀器分別稱取對(duì)照品，之后再分別添加90%甲醇，制成10.8μg/ml的大黃酚與7.53μg/ml的混合溶液。將封面積看作是縱坐標(biāo)，而將進(jìn)樣量看作是橫坐標(biāo)，以此繪制成為一個(gè)標(biāo)準(zhǔn)曲線。實(shí)踐發(fā)現(xiàn)，大黃酚進(jìn)樣量保持在0.022-0.32μg之間，并且與峰面積保持著比較好的線性關(guān)系，大黃素的進(jìn)樣量在0.015一0.22μg，與峰面積呈良好的線性關(guān)系。
　　3、穩(wěn)定性試驗(yàn)
　　取各供試品溶液及“精密度試驗(yàn)”項(xiàng)下的對(duì)照品溶液，分別于0，2，6，12，24h進(jìn)樣測(cè)定，考察了24h內(nèi)的穩(wěn)定性。結(jié)果各供試品溶液中大黃酚峰面積的RSD為0.41%一0.57%，大黃素峰面積的RSD為0.24%一0.99%；對(duì)照品溶液中大黃酚峰面積的RSD為0.26%，大黃素峰面積的RSD為0.40%。說明供試品溶液與對(duì)照品溶液在24h內(nèi)穩(wěn)定。
　　4、重復(fù)性試驗(yàn)
　　各樣品取樣量的80%，100%，120%，同一批樣品取9份，按上述方法制備溶液，按“2”項(xiàng)下色譜條件測(cè)定。各樣品9次測(cè)定的結(jié)果，見表1。說明方法重復(fù)性良好。
　　5、加樣回收率實(shí)驗(yàn)
　　按上述方法各樣品取樣量的1/2，稱取已知含量的同一批樣品9份，平均分為3組，每組按此取樣量的樣品中大黃酚及大黃素含有量的60%，100%，140%添加對(duì)照品，照上述方法制備溶液測(cè)定，計(jì)算回收率。
　　6、樣品的測(cè)定
　　采用上述的樣品處理方法，制備各供試品溶液，按色譜條件進(jìn)樣，采用外標(biāo)法，計(jì)算各樣品含量，具體結(jié)果見表2。
　　三、討論
　　1、研究者選擇應(yīng)用二極管陣列檢測(cè)器分別為大黃酚與大黃素進(jìn)行光譜掃描，最終發(fā)現(xiàn)大黃酚共出現(xiàn)了3個(gè)吸收峰，分別為222nm，靈敏性最佳、254nm靈敏性次之、288nm子佛靈敏性最差等；大黃素共出現(xiàn)了4個(gè)吸收峰，分別為220nm，靈敏性最佳；288nm靈敏性次之；265nm靈敏性稍差；252nm靈敏性最差，另外大黃素的對(duì)照品以及樣品波峰非常相似，由于我國(guó)藥典記錄的波長(zhǎng)也相同，基于此，研究者最終選擇254nm充當(dāng)測(cè)定波長(zhǎng)。
　　2、大黃酚與大黃素含量測(cè)定傳統(tǒng)方法如下：使用酸性比較強(qiáng)的甲醇水解，需要注意的是水解溫度要低于算酸水溫度。此種方法因?yàn)榉宇惡苌俦黄茐�，再加之還需要萃取與蒸干，因此從理論上講，此種方法測(cè)量更加符合現(xiàn)實(shí)。為了能夠讓溶液酸度控制在一定范圍內(nèi)，研究者將用于實(shí)驗(yàn)試品溶液添加了一定量的堿液，PH值保持在3-4之間，使得大黃酚與大黃素始終都處于比較好的分子狀態(tài)，經(jīng)過經(jīng)驗(yàn)色譜峰分離呈現(xiàn)出良好的態(tài)勢(shì)，而且峰形也比較對(duì)稱。
　　3、據(jù)統(tǒng)計(jì)我國(guó)223家廠家允許生產(chǎn)三黃片，而需要測(cè)定大黃等元素含量的廠家則達(dá)到了上千家，若這些廠家都能夠應(yīng)用本文介紹的方法，不僅能夠減少有機(jī)試劑的使用，還能夠降低環(huán)境污染，對(duì)操作人員的身心健康也有一定的保證。
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