免疫室SOP作業(yè)指導(dǎo)書(shū)
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主題內(nèi)容 乙型肝炎病毒表面抗原定量測(cè)定
一、目的:規(guī)范 乙型肝炎病毒表面抗原 測(cè)定的標(biāo)準(zhǔn)操作程序,確保 乙型肝炎病毒表面
抗原 測(cè)定的結(jié)果準(zhǔn)確有效。
二、適用范圍:在 AutoLumo A2000 化學(xué)發(fā)光檢測(cè)儀上定量測(cè)定人血清中的 乙型肝炎病毒
表面抗原 。
三、臨床意義
乙型病毒性肝炎是一種重要的公眾危害性疾病,據(jù)估計(jì)全球范圍內(nèi)目前
大約有 3 億乙肝病毒攜帶者。感染乙型病毒性肝炎可引起廣泛的急、慢性肝
臟疾病,流行病學(xué)研究已經(jīng)清楚地表明乙肝病毒與肝細(xì)胞癌的發(fā)生有聯(lián)系。
HBsAg 是乙肝病毒顆粒(HBV)的外殼成分,為大小不一的多肽。感染乙
型肝炎病毒后,機(jī)體會(huì)產(chǎn)生各種不同模式的抗原、抗體血清學(xué)免疫應(yīng)答反應(yīng)。
通過(guò)檢測(cè)這些標(biāo)志物,不僅可以診斷感染,而且還可以判斷疾病的進(jìn)程和預(yù)
后。HBsAg 是 HBV 感染后第一個(gè)標(biāo)志物,是提示樣本是否有潛在傳染性的最
好的間接指標(biāo)。
四、方法原理
本產(chǎn)品采用雙抗體夾心法原理進(jìn)行檢測(cè)。用抗-HBs 抗體包被磁微粒,用
辣根過(guò)氧化物酶標(biāo)記的抗-HBs 抗體制備酶結(jié)合物。通過(guò)免疫反應(yīng)形成抗體-
抗原-抗體-酶復(fù)合物,該復(fù)合物催化發(fā)光底物發(fā)出光子,發(fā)光強(qiáng)度與 HBsAg
含量成正比。
五、標(biāo)本的采集與處理
5.1.
采用正確醫(yī)用技術(shù)收集血清/血漿樣本,推薦對(duì)于使用普通管采血的樣
本,離心前樣本應(yīng) 37℃孵育至少 1h;對(duì)于使用促凝管采血的樣本,離
心前樣本應(yīng) 37℃孵育至少 0.5h,離心條件 10000g/min,10min;對(duì)于使
用抗凝管采血的樣本,離心條件 10000g/min,10min?鼓芡扑]使用
肝素作為抗凝劑,避免使用枸櫞酸鈉和 EDTA 抗凝劑。
5.2.
樣本中的沉淀物和懸浮物可能會(huì)影響試驗(yàn)結(jié)果,應(yīng)離心除去,并確定樣
本未變質(zhì)方可使用。
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5.3. 溶血或脂血的樣本不能用于測(cè)定。
5.4.
樣本收集后在室溫放置不可超過(guò) 8 小時(shí);如果不在 8 小時(shí)內(nèi)檢測(cè)需將樣
本放置在 2~8℃的冰箱中;若需 48 小時(shí)以上保存或運(yùn)輸,則應(yīng)凍存于
-20℃以下,避免反復(fù)凍融。使用前恢復(fù)到室溫,輕輕搖動(dòng)混勻。
5.5.避免反復(fù)凍融。使用前恢復(fù)到室溫,輕輕搖動(dòng)混勻。
六、標(biāo)本拒收標(biāo)準(zhǔn)
1)嚴(yán)重溶血、脂血
2)標(biāo)本標(biāo)識(shí)不明
七、儀器與材料
7.1.儀器:AutoLumo A2000 化學(xué)發(fā)光檢測(cè)儀
7.2.試劑:AutoLumo A2000 專用 乙型肝炎病毒表面抗原 試劑
7.2.1.試劑準(zhǔn)備:本試劑為即用型試劑,可以直接放在儀器上。
7.2.2.試劑盒于 2~8℃儲(chǔ)存,有效期 12 個(gè)月。
7.2.3.試劑盒應(yīng)防止冷凍,避免強(qiáng)光照射。
7.2.4.試劑盒開(kāi)啟使用后,2~8℃保存可使用 1 個(gè)月。
7.2.5.試劑盒可適應(yīng) 1 周內(nèi)常溫運(yùn)輸,運(yùn)輸過(guò)程中應(yīng)輕拿輕放,避免重壓,防止雨雪淋濕和陽(yáng)光曝曬。
7.2.6.試劑機(jī)載穩(wěn)定性
7.2.6.1. 試劑包(磁微;鞈乙、酶結(jié)合物)豎直向上存放,
在 2 ~10°C 環(huán)境下冷藏保存 2 小時(shí)后,才可上機(jī)使
用。首次使用后,機(jī)載或在 2 ~10°C 環(huán)境下穩(wěn)定期
為 28 天。
7.2.6.2. 校準(zhǔn)品開(kāi)瓶后保存于2~8°C,穩(wěn)定期可維持1個(gè)月;
若需使用更長(zhǎng)時(shí)間,應(yīng)根據(jù)需要進(jìn)行分裝,于-20℃
凍存(可以保存2個(gè)月),但應(yīng)避免反復(fù)凍融。
八、檢驗(yàn)方法
8.1. 消耗品檢查:
8.1.1.
根據(jù)儀器說(shuō)明裝載或檢查消耗品是否充足。
8.1.2. 參考相應(yīng)的儀器系統(tǒng)操作說(shuō)明。
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8.2. 試劑包裝載:
8.2.1. 試劑包首次上機(jī)前,輕輕地倒轉(zhuǎn)試劑包多次以混合新試劑包內(nèi)的成
份,避免產(chǎn)生氣泡。不要倒轉(zhuǎn)已經(jīng)打開(kāi)的試劑包。
8.2.2. 儀器通過(guò)掃描試劑包條碼自動(dòng)獲取測(cè)試所需的參數(shù)。
8.2.3. 如果特殊情況下儀器無(wú)法識(shí)別條碼,可以手工輸入。
8.2.4. 參考相應(yīng)的儀器系統(tǒng)操作說(shuō)明。
8.3. 測(cè)試:
8.3.1. 將樣本容器放置在儀器配套樣本架中,每次測(cè)試樣本量為 150µl。
8.3.2. 裝載樣本架,在儀器軟件界面中輸入樣本信息。
8.3.3. 選擇“運(yùn)行”開(kāi)始測(cè)試,系統(tǒng)自動(dòng)進(jìn)行試驗(yàn)操作。
8.3.4. 參考相應(yīng)的儀器系統(tǒng)操作說(shuō)明。
8.4. 定標(biāo):
8.4.1. 儀器通過(guò)掃描條碼卡自動(dòng)獲取測(cè)試所需的參數(shù)。
8.4.2. 如果特殊情況下儀器無(wú)法識(shí)別條碼卡,可以手工輸入。
8.4.3. 將校準(zhǔn)品轉(zhuǎn)移至樣本容器,放置在儀器配套樣本架中。
8.4.4. 裝載樣本架,在儀器軟件界面中輸入定標(biāo)信息。
8.4.5. 選擇“運(yùn)行”開(kāi)始測(cè)試,生成定標(biāo)曲線。
8.4.6. 定標(biāo)曲線有效期為 28 天。
8.4.7. 參考相應(yīng)的儀器系統(tǒng)操作說(shuō)明。
8.4.8. 出現(xiàn)以下情況需要進(jìn)行定標(biāo)曲線的重新生成:
8.4.8.1. 質(zhì)控結(jié)果經(jīng)重復(fù)測(cè)定后仍然超出范圍;
8.4.8.2. 試劑盒或發(fā)光底物液的批號(hào)更改;
8.4.8.3. 超出定標(biāo)曲線的有效期限;
8.4.8.4. 儀器重要部件更換或維修。
8.5. 質(zhì)控:
8.5.1. 使用至少兩個(gè)分析物水平的質(zhì)控品進(jìn)行質(zhì)控。
8.5.2. 出現(xiàn)以下情況需要進(jìn)行質(zhì)控:
8.5.2.1. 測(cè)試試劑盒使用超過(guò) 24 小時(shí);
8.5.2.2. 更換新的試劑盒;
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8.5.2.3. 重新生成定標(biāo)曲線;
8.5.2.4. 停機(jī)。
8.5.3. 各實(shí)驗(yàn)室需根據(jù)自身情況建立適合本實(shí)驗(yàn)室的可接受范圍,以確
保合適的測(cè)試性能。
8.5.4. 質(zhì)控值應(yīng)落在規(guī)定的范圍內(nèi),如出現(xiàn)失控,應(yīng)采取糾正措施。
8.6. 稀釋
8.6.1. 使用手工稀釋或儀器自動(dòng)稀釋功能,儀器自動(dòng)稀釋的最大比例為
1:100。
8.6.2. 手工稀釋使用系統(tǒng)通用樣品稀釋液進(jìn)行稀釋,將得到的檢測(cè)結(jié)果
乘以稀釋倍數(shù)計(jì)算最終結(jié)果。
8.6.3. 選擇儀器自動(dòng)稀釋功能,可以得到準(zhǔn)確的檢測(cè)結(jié)果,參考相應(yīng)的儀
器系統(tǒng)操作說(shuō)明以及幫助系統(tǒng)。
8.6.4. 稀釋后的樣本含量應(yīng)不低于 0.05IU/ml。
8.7.結(jié)果計(jì)算:
選擇適當(dāng)?shù)那擬合方式,本試劑盒推薦采用四參數(shù)擬合方式,以校
準(zhǔn)品濃度值為 x 軸,以校準(zhǔn)品發(fā)光強(qiáng)度 log 值為 y 軸建立定標(biāo)曲線。根據(jù)
待測(cè)樣本的發(fā)光強(qiáng)度值回算相應(yīng)的濃度值。儀器自動(dòng)操作系統(tǒng)可通過(guò)存儲(chǔ)
的定標(biāo)曲線以及樣本測(cè)試得到的發(fā)光值自動(dòng)計(jì)算樣本測(cè)試結(jié)果。
九、參考范圍
檢測(cè) 1040 例樣本,用 ROC 曲線方法確定正常參考值為<0.05IU/ml;
建議各實(shí)驗(yàn)室根據(jù)自己實(shí)際條件及接觸人群建立正常參考值。本試劑盒
僅作為診斷的輔助手段之一,供臨床醫(yī)生參考。
十、檢驗(yàn)結(jié)果的解釋
10.1.
用本試劑盒檢測(cè)結(jié)果濃度值為 0.04~0.06IU/ml 的弱反應(yīng)性可疑樣本,
建議復(fù)孔重新測(cè)定,如果雙孔復(fù)查濃度值均小于 0.05IU/ml,結(jié)果判為
陰性,如果單份或雙份測(cè)定不低于 0.05IU/ml,結(jié)果判為有反應(yīng)性,有
條件的實(shí)驗(yàn)室建議做中和確證實(shí)驗(yàn),同時(shí)動(dòng)態(tài)觀察。
10.2. 本試劑盒測(cè)定范圍為 0.05~250IU/ml,濃度值大于 250IU/ml 的樣本,
其結(jié)果是通過(guò)定標(biāo)曲線外延得出的計(jì)算結(jié)果。如果要獲得其更準(zhǔn)確的結(jié)
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果,需對(duì)樣本進(jìn)行稀釋后重新測(cè)定,推薦稀釋比例為 1/500,使用系統(tǒng)
通用樣品稀釋液進(jìn)行稀釋。稀釋后仍超出線性范圍的建議手工稀釋并增
大稀釋比例。
10.3. 由于方法學(xué)或免疫特異性等原因,使用不同生產(chǎn)商的試劑對(duì)同一份樣
本進(jìn)行檢測(cè)可能會(huì)得到不同的檢測(cè)結(jié)果,因此不同試劑檢測(cè)所得結(jié)果
不應(yīng)直接相互比較,以免造成錯(cuò)誤的醫(yī)學(xué)解釋,建議實(shí)驗(yàn)室在檢測(cè)報(bào)
告中注明所用試劑特征。系列監(jiān)測(cè)中,如果改變?cè)噭╊愋,則應(yīng)進(jìn)行
額外的連續(xù)性檢測(cè)并與原有試劑結(jié)果進(jìn)行平行比較以重新確定基線
值。
十一、檢驗(yàn)方法的局限性
11.1. 本試劑盒僅作為診斷的輔助手段之一,臨床診斷應(yīng)與臨床檢查、病史
及其他檢測(cè)相結(jié)合。
11.2. 樣本中的異嗜性抗體或類風(fēng)濕因子會(huì)干擾檢測(cè)結(jié)果。此類樣本不適合
用本試劑盒進(jìn)行檢測(cè)。
11.3. 溶血、脂血或渾濁的樣本可能會(huì)造成不正確的檢測(cè)結(jié)果。
十二、產(chǎn)品性能特征
12.1. 陰性參考品符合率:檢測(cè)國(guó)家陰性參考品 20 份,不出現(xiàn)假陽(yáng)性。
12.2.
陽(yáng)性參考品符合率:檢測(cè)國(guó)家陽(yáng)性參考品 3 份,不出現(xiàn)假陰性。
12.3. 最低檢出量:用國(guó)家靈敏度參考品進(jìn)行檢測(cè),符合相應(yīng)參考品要求。
12.4. 精密性:10 孔平行檢測(cè)濃度值為 0.5IU/ml 樣本,CV%≤15.0%;10
孔平行檢測(cè)濃度值為 1.5IU/ml 樣本,CV%≤10.0%。
12.5. 線性:在 0.05IU/ml~250IU/ml 范圍內(nèi),線性相關(guān)系數(shù)(r)不低于
0.9900。
12.6. 分析特異性:與抗-HIV(1+2)、抗-HCV、抗-HAV 等病毒性抗體無(wú)
交叉反應(yīng)。2.5mg/ml 血紅蛋白、200mg/L 膽紅素、20g/L 甘油三酯和
500mg/dl 膽固醇對(duì)檢測(cè)結(jié)果無(wú)顯著干擾。
十三、參考文獻(xiàn)
1.Lok ASE, McMahon BJ. AASLD practice guidelines:chronic hepatitis B.
Hepatology, 2004, 34: 1225-1241.
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6 current and emerging prevention and control measures. J Viral Hepat, 2004, 11:
97-107.
3.巴德年,1998 年.當(dāng)代免疫學(xué)技術(shù)與應(yīng)用.北京醫(yī)科大學(xué)中國(guó)協(xié)和醫(yī)科大學(xué)聯(lián)
合出版社.
4.陶義訓(xùn), 1997 年第二版,免疫學(xué)與免疫學(xué)檢驗(yàn).人民衛(wèi)生出版社.
5.中華醫(yī)學(xué)會(huì)傳染病與寄生蟲(chóng)病學(xué)分會(huì)、肝病學(xué)分會(huì). 病毒性肝炎防治方案. 中華傳染病雜志, 2001, 19:56-62.
主題內(nèi)容 乙型肝炎病毒表面抗體定量測(cè)定
一、 目的:規(guī)范 乙型肝炎病毒表面抗體 測(cè)定的標(biāo)準(zhǔn)操作程序,確保 乙型肝炎病毒表面
抗體 測(cè)定的結(jié)果準(zhǔn)確有效。
二、 適用范圍:在 AutoLumo A2000 化學(xué)發(fā)光檢測(cè)儀上定量測(cè)定人血清中的 乙型肝炎病毒
表面抗體 。
三、臨床意義
乙型病毒性肝炎是一種重要的公眾危害性疾病,據(jù)估計(jì)全球范圍內(nèi)目前
大約有 3 億乙肝病毒攜帶者。感染乙型病毒性肝炎可引起廣泛的急、慢性肝
臟疾病,流行病學(xué)研究已經(jīng)清楚地表明乙肝病毒與肝細(xì)胞癌的發(fā)生有聯(lián)系。
表面抗體(Anti-HBs)是一種保護(hù)性抗體,是乙肝感染后痊愈或趨向治愈
的象征;全程(3 針)疫苗接種結(jié)束后 1 個(gè)月檢測(cè)保護(hù)性表面抗體(Anti-HBs)
的濃度,能夠判定免疫效果。關(guān)于表面抗體與保護(hù)力的關(guān)系,世界標(biāo)準(zhǔn)未完
全統(tǒng)一,目前普遍認(rèn)為普通人群表面抗體濃度值≥10mIU/ml,就有足夠的保
護(hù)作用;高危人群表面抗體濃度值≥100mIU/ml,具有足夠的保護(hù)作用。肝
移植、血液透析及免疫抑制等病人定期檢測(cè)表面抗體濃度值,每次檢測(cè)值≥
100mIU/ml 為宜。
四、方法原理
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本產(chǎn)品采用雙抗原夾心法原理進(jìn)行檢測(cè)。用表面抗原包被磁微粒,用辣
根過(guò)氧化物酶標(biāo)記表面抗原制備酶結(jié)合物。通過(guò)免疫反應(yīng)形成抗原-抗體-酶
標(biāo)抗原復(fù)合物,該復(fù)合物催化發(fā)光底物發(fā)出光子,發(fā)光強(qiáng)度與表面抗體的含
量成正比。
五、標(biāo)本的采集與處理
5.1.
采用正確醫(yī)用技術(shù)收集血清/血漿樣本,推薦對(duì)于使用普通管采血的樣
本,離心前樣本應(yīng) 37℃孵育至少 1h;對(duì)于使用促凝管采血的樣本,離
心前樣本應(yīng) 37℃孵育至少 0.5h,離心條件 10000g/min,10min;對(duì)于使
用抗凝管采血的樣本,離心條件 10000g/min,10min?鼓芡扑]使用
肝素鈉作為抗凝劑,避免使用枸櫞酸鈉和 EDTA 抗凝劑。
5.2.
樣本中的沉淀物和懸浮物可能會(huì)影響試驗(yàn)結(jié)果,應(yīng)離心除去,并確定樣
本未變質(zhì)方可使用。
5.3. 溶血或脂血的樣本不能用于測(cè)定。
5.4. 樣本收集后在室溫放置不可超過(guò) 8 小時(shí);如果不在 8 小時(shí)內(nèi)檢測(cè)需將樣
本放置在 2~8℃的冰箱中;若需 48 小時(shí)以上保存或運(yùn)輸,則應(yīng)凍存于
-20℃以下,避免反復(fù)凍融。使用前恢復(fù)到室溫,輕輕搖動(dòng)混勻。
六、標(biāo)本拒收標(biāo)準(zhǔn)
1)嚴(yán)重溶血、脂血
2)標(biāo)本標(biāo)識(shí)不明
七、儀器與材料
7.1.儀器:
適用于 AutoLumo A2000 化學(xué)發(fā)光檢測(cè)儀。
7.2.試劑:AutoLumo A2000 專用 乙型肝炎病毒表面抗體 試劑
7.2.1.試劑準(zhǔn)備:本試劑為即用型試劑,可以直接放在儀器上。
7.2.2.試劑盒于 2~8℃儲(chǔ)存,有效期 12 個(gè)月。
7.2.3.試劑盒應(yīng)防止冷凍,避免強(qiáng)光照射。
7.2.4.試劑盒開(kāi)啟使用后,2~8℃保存可使用 1 個(gè)月。
7.2.5.試劑盒可適應(yīng) 1 周內(nèi)常溫運(yùn)輸,運(yùn)輸過(guò)程中應(yīng)輕拿輕放,避免重壓,防止雨雪淋濕和陽(yáng)光曝曬。
7.2.6.試劑機(jī)載穩(wěn)定性
7.2.6.1. 試劑包(磁微;鞈乙、酶結(jié)合物)豎直向上存放,
8
在 2 ~10°C 環(huán)境下冷藏保存 2 小時(shí)后,才可上機(jī)使
用。首次使用后,機(jī)載或在 2 ~10°C 環(huán)境下穩(wěn)定期
為 28 天。
7.2.6.2. 校準(zhǔn)品開(kāi)瓶后保存于2~8°C,穩(wěn)定期可維持1個(gè)月;若
需使用更長(zhǎng)時(shí)間,應(yīng)根據(jù)需要進(jìn)行分裝,于-20℃凍
存(可以保存2個(gè)月),但應(yīng)避免反復(fù)凍融。
八、檢驗(yàn)方法
8.1. 消耗品檢查:
8.1.1. 根據(jù)儀器說(shuō)明裝載或檢查消耗品是否充足。
8.1.2. 參考相應(yīng)的儀器系統(tǒng)操作說(shuō)明。
8.2. 試劑包裝載:
8.2.1. 試劑包首次上機(jī)前,輕輕地倒轉(zhuǎn)試劑包多次以混合新試劑包內(nèi)的成
份,避免產(chǎn)生氣泡。不要倒轉(zhuǎn)已經(jīng)打開(kāi)的試劑包。
8.2.2. 儀器通過(guò)掃描試劑包條碼自動(dòng)獲取測(cè)試所需的參數(shù)。
8.2.3. 如果特殊情況下儀器無(wú)法識(shí)別條碼,可以手工輸入。
8.2.4. 參考相應(yīng)的儀器系統(tǒng)操作說(shuō)明。
8.3. 測(cè)試:
8.3.1. 將樣本容器放置在儀器配套樣本架中,每次測(cè)試樣本量為 50µl。
8.3.2. 裝載樣本架,在儀器軟件界面中輸入樣本信息。
8.3.3. 選擇“運(yùn)行”開(kāi)始測(cè)試,系統(tǒng)自動(dòng)進(jìn)行試驗(yàn)操作。
8.3.4. 參考相應(yīng)的儀器系統(tǒng)操作說(shuō)明。
8.4. 定標(biāo):
8.4.1. 儀器通過(guò)掃描條碼卡自動(dòng)獲取測(cè)試所需的參數(shù)。
8.4.2. 如果特殊情況下儀器無(wú)法識(shí)別條碼卡,可以手工輸入。
8.4.3. 將校準(zhǔn)品轉(zhuǎn)移至樣本容器,放置在儀器配套樣本架中。
8.4.4. 裝載樣本架,在儀器軟件界面中輸入定標(biāo)信息。
8.4.5. 選擇“運(yùn)行”開(kāi)始測(cè)試,生成定標(biāo)曲線。
8.4.6. 定標(biāo)曲線有效期為 28 天。
8.4.7.
參考相應(yīng)的儀器系統(tǒng)操作說(shuō)明。
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8.4.8. 出現(xiàn)以下情況需要進(jìn)行定標(biāo)曲線的重新生成:
8.4.8.1. 質(zhì)控結(jié)果經(jīng)重復(fù)測(cè)定后仍然超出范圍;
8.4.8.2. 試劑盒或發(fā)光底物液的批號(hào)更改;
8.4.8.3. 超出定標(biāo)曲線的有效期限;
8.4.8.4. 儀器重要部件更換或維修。
8.5. 質(zhì)控:
8.5.1. 使用至少兩個(gè)分析物水平的質(zhì)控品進(jìn)行質(zhì)控。
8.5.2. 出現(xiàn)以下情況需要進(jìn)行質(zhì)控:
8.5.2.1. 測(cè)試試劑盒使用超過(guò) 24 小時(shí);
8.5.2.2. 更換新的試劑盒;
8.5.2.3. 重新生成定標(biāo)曲線;
8.5.2.4.
停機(jī)。
8.5.3. 各實(shí)驗(yàn)室需根據(jù)自身情況建立適合本實(shí)驗(yàn)室的可接受范圍,以確保
合適的測(cè)試性能。
8.5.4. 質(zhì)控值應(yīng)落在規(guī)定的范圍內(nèi),如出現(xiàn)失控,應(yīng)采取糾正措施。
8.6. 稀釋
8.6.1. 使用手工稀釋或儀器自動(dòng)稀釋功能,儀器自動(dòng)稀釋的最大比例為
1:100。
8.6.2. 手工稀釋使用系統(tǒng)通用樣品稀釋液進(jìn)行稀釋,將得到的檢測(cè)結(jié)果
乘以稀釋倍數(shù)計(jì)算最終結(jié)果。
8.6.3. 選擇儀器自動(dòng)稀釋功能,可以得到準(zhǔn)確的檢測(cè)結(jié)果,參考相應(yīng)的儀
器系統(tǒng)操作說(shuō)明以及幫助系統(tǒng)。
8.6.4. 稀釋后的樣本含量應(yīng)不低于 5mIU /ml。
8.7.結(jié)果計(jì)算:
選擇適當(dāng)?shù)那擬合方式,本試劑盒推薦采用四參數(shù)擬合方式,以校
準(zhǔn)品濃度值為 x 軸,以校準(zhǔn)品發(fā)光強(qiáng)度 log 值為 y 軸建立定標(biāo)曲線。根據(jù)
待測(cè)樣本的發(fā)光強(qiáng)度值回算相應(yīng)的濃度值。儀器自動(dòng)操作系統(tǒng)可通過(guò)存儲(chǔ)
的定標(biāo)曲線以及樣本測(cè)試得到的發(fā)光值自動(dòng)計(jì)算樣本測(cè)試結(jié)果。
九、參考范圍
10
正常參考值:<10mIU/ml
建議各實(shí)驗(yàn)室根據(jù)自己實(shí)際條件及接觸人群建立正常參考值。本試劑盒
僅作為診斷的輔助手段之一,供臨床醫(yī)生參考。
十、檢驗(yàn)結(jié)果的解釋
10.1.
用本試劑盒檢測(cè)結(jié)果濃度值為 8.0~12.0 mIU/ml 的弱反應(yīng)性可疑樣
本,建議雙份重新測(cè)定,如果雙份復(fù)查濃度值均小于 10 mIU/ml,結(jié)果
判為陰性,如果單份或雙份測(cè)定不低于 10 mIU/ml,結(jié)果判為陽(yáng)性,同
時(shí)建議動(dòng)態(tài)觀察。
10.2. 本試劑盒測(cè)定范圍為 5~1000mIU/ml,濃度值大于 1000mIU/ml 的樣本,
其結(jié)果是通過(guò)定標(biāo)曲線外延得出的計(jì)算結(jié)果。如果要獲得其更準(zhǔn)確的結(jié)
果,需對(duì)樣本進(jìn)行稀釋后重新測(cè)定,推薦稀釋比例為 1/100,使用系統(tǒng)
通用樣品稀釋液進(jìn)行稀釋。稀釋后仍超出線性范圍的建議手工稀釋并增
大稀釋比例。
10.3. 由于方法學(xué)或免疫特異性等原因,使用不同生產(chǎn)商的試劑對(duì)同一份樣
本進(jìn)行檢測(cè)可能會(huì)得到不同的檢測(cè)結(jié)果,因此不同試劑檢測(cè)所得結(jié)果
不應(yīng)直接相互比較,以免造成錯(cuò)誤的醫(yī)學(xué)解釋,建議實(shí)驗(yàn)室在檢測(cè)報(bào)
告中注明所用試劑特征。系列監(jiān)測(cè)中,如果改變?cè)噭╊愋,則應(yīng)進(jìn)行
額外的連續(xù)性檢測(cè)并與原有試劑結(jié)果進(jìn)行平行比較以重新確定基線
值。
十一、檢驗(yàn)方法的局限性
11.1.
本試劑盒僅作為診斷的輔助手段之一,臨床診斷應(yīng)與臨床檢查、病
史及其他檢測(cè)相結(jié)合。
11.2. 樣本中的異嗜性抗體或類風(fēng)濕因子會(huì)干擾檢測(cè)結(jié)果。此類樣本不適合
用本試劑盒進(jìn)行檢測(cè)。
11.3.
溶血、脂血或渾濁的樣本可能會(huì)造成不正確的檢測(cè)結(jié)果。
十二、產(chǎn)品性能特征
12.1.
符合率:與 SFDA 批準(zhǔn)的試劑平行檢測(cè) 1024 份臨床樣本,陰性符合率
99.58%,陽(yáng)性符合率 99.02%,總符合率 99.41%。
12.2.
最低檢出限:≤10mIU/ml。
11
12.3.
精密性:10 孔平行檢測(cè)濃度值為 10mIU/ml 樣本,CV%≤15.0%;10 孔
平行檢測(cè)濃度值為 100mIU/ml 樣本,CV%≤10.0%。
12.4. 線性:在 5~1000mIU/ml 范圍內(nèi),線性相關(guān)系數(shù)(r)不低于 0.9900。
12.5. 分析特異性:與抗-HIV(1+2)、抗-HCV、抗-HAV 等病毒性抗體無(wú)交叉
反應(yīng)。2.5mg/ml 血紅蛋白、200mg/L 膽紅素、10g/L 甘油三酯和 500mg/dl
膽固醇對(duì)檢測(cè)結(jié)果無(wú)顯著干擾。
12.6. HOOK 效應(yīng):測(cè)定 HBsAb 濃度值為 30000mIU/ml 的樣本,未出現(xiàn) HOOK
效應(yīng)引起的假陰性結(jié)果。
十三、參考文獻(xiàn)
1.Lok ASE, McMahon BJ. AASLD practice guidelines:chronic hepatitis B.
Hepatology, 2004, 34: 1225-1241.
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5.中華醫(yī)學(xué)會(huì)傳染病與寄生蟲(chóng)病學(xué)分會(huì)、肝病學(xué)分會(huì). 病毒性肝炎防治方案.
主題內(nèi)容 毒 乙型肝炎病毒 e 抗原 定量測(cè)定
一、 目的:規(guī)范 乙型肝炎病毒 e 抗原 測(cè)定的標(biāo)準(zhǔn)操作程序,確保 乙型肝炎病毒 e 抗原
測(cè)定的結(jié)果準(zhǔn)確有效。
二、 適用范圍:在 AutoLumo A2000 化學(xué)發(fā)光檢測(cè)儀上定量測(cè)定人血清中的 乙型肝炎病毒
e 抗原 。
三、臨床意義
乙型肝炎病毒 e 抗原(HBeAg),一般通稱 e 抗原。它來(lái)源于乙型肝炎病
毒的核心,是核心抗原的亞成分,或是核心抗原裂解后的產(chǎn)物,是可溶性蛋
白 [1] 。當(dāng)核心抗原裂解時(shí),可溶性蛋白部分(即 e 抗原)就溶于血清中,存
12
在于血液循環(huán)中。有研究表明,在 PegIFNα2a 治療過(guò)程中,HBeAg 水平對(duì)乙
肝治療應(yīng)答有較好的預(yù)測(cè)價(jià)值 [2] 。許多專家關(guān)注聚乙二醇干擾素治療過(guò)程中
HBeAg 或 HBsAg 濃度的動(dòng)態(tài)變化,認(rèn)為這種量的變化往往是抗原消失或血
清轉(zhuǎn)換的前提,具有療效預(yù)測(cè)作用。對(duì)于乙肝治療過(guò)程中 HBeAg 和 HBsAg
濃度明顯下降的患者應(yīng)鼓勵(lì)繼續(xù)治療,以爭(zhēng)取獲得更好的療效 [3] 。
四、 方法原理
本產(chǎn)品采用雙抗體夾心法原理進(jìn)行檢測(cè)。用抗-HBe 制備磁微粒,辣根過(guò)
氧化物酶標(biāo)記抗-HBe 制備酶結(jié)合物。通過(guò)免疫反應(yīng)形成抗體-抗原-酶標(biāo)抗體
復(fù)合物,該復(fù)合物催化發(fā)光底物液發(fā)出光子,發(fā)光強(qiáng)度與 HBeAg 的含量成正
比。
五、標(biāo)本的采集與處理
5.1. 采用正確醫(yī)用技術(shù)收集血清/血漿樣本,推薦對(duì)于使用普通管采血的樣
本,離心前樣本應(yīng) 37℃孵育至少 1h;對(duì)于使用促凝管采血的樣本,離心
前樣本應(yīng) 37℃孵育至少 0.5h,離心條件 10000g/min,10min;對(duì)于使用
抗凝管采血的樣本,離心條件 10000g/min,10min?鼓芡扑]使用肝
素鈉作為抗凝劑,避免使用枸櫞酸鈉和 EDTA 抗凝劑。
5.2. 樣本中的沉淀物和懸浮物可能會(huì)影響試驗(yàn)結(jié)果,應(yīng)離心除去。
5.3. 嚴(yán)重溶血、脂血或渾濁的樣本不能用于測(cè)定。
5.4. 樣本收集后在室溫放置不可超過(guò) 8 小時(shí);如果不在 8 小時(shí)內(nèi)檢測(cè)需將樣
本放置在 2~8℃的冰箱中;若需 48 小時(shí)以上保存或運(yùn)輸,則應(yīng)采用正確
離心條件提取血清或血漿凍存于-20℃以下,避免反復(fù)凍融。使用前恢復(fù)
到室溫,輕輕搖動(dòng)混勻。
六、標(biāo)本拒收標(biāo)準(zhǔn)
1)嚴(yán)重溶血、脂血
2)標(biāo)本標(biāo)識(shí)不明
七、儀器與材料
7.1.儀器:
適用于 Lucy2、Lumo、AutoLumo A2000 化學(xué)發(fā)光檢測(cè)儀。
7.2.試劑:AutoLumo A2000 專用 乙型肝炎病毒 e 抗原 試劑
7.2.1.試劑準(zhǔn)備:本試劑為即用型試劑,可以直接放在儀器上。
7.2.2.試劑盒于 2~8℃儲(chǔ)存,有效期 12 個(gè)月。
13
7.2.3.試劑盒應(yīng)防止冷凍,避免強(qiáng)光照射。
7.2.4.試劑盒開(kāi)啟使用后,2~8℃保存可使用 1 個(gè)月。
7.2.5.試劑盒可適應(yīng) 1 周內(nèi)常溫運(yùn)輸,運(yùn)輸過(guò)程中應(yīng)輕拿輕放,避免重壓,防止雨雪淋濕和陽(yáng)光曝曬。
7.2.6.試劑機(jī)載穩(wěn)定性
7.2.6.1. 試劑包(磁微;鞈乙、酶結(jié)合物)豎直向上存放,
在 2~10°C 環(huán)境下冷藏保存 2 小時(shí)后,才可上機(jī)使
用。首次使用后,機(jī)載或在 2 ~10°C 環(huán)境下穩(wěn)定期
為 28 天。
7.2.6.2. 要進(jìn)行分裝,于-20℃凍存,但應(yīng)避免反復(fù)凍融。
八、檢驗(yàn)方法
8.1. 消耗品檢查:
8.1.1. 根據(jù)儀器說(shuō)明裝載或檢查消耗品是否充足。
8.1.2. 參考相應(yīng)的儀器系統(tǒng)操作說(shuō)明。
8.2. 試劑包裝載:
8.2.1. 試劑包首次上機(jī)前,輕輕地倒轉(zhuǎn)試劑包多次以混合新試劑包內(nèi)的成
分,避免產(chǎn)生氣泡。不要倒轉(zhuǎn)已經(jīng)打開(kāi)的試劑包。
8.2.2. 儀器通過(guò)掃描試劑包條碼自動(dòng)獲取測(cè)試所需的參數(shù)。
8.2.3. 如果特殊情況下儀器無(wú)法識(shí)別條碼,可以手工輸入。
8.2.4. 參考相應(yīng)的儀器系統(tǒng)操作說(shuō)明。
8.3. 測(cè)試:
8.3.1. 將樣本容器放置在儀器配套樣本架中,每次測(cè)試樣本量為 50µl。
8.3.2.
裝載樣本架,在儀器軟件界面中輸入樣本信息。
8.3.3. 選擇“運(yùn)行”開(kāi)始測(cè)試,系統(tǒng)自動(dòng)進(jìn)行試驗(yàn)操作。
8.3.4. 參考相應(yīng)的儀器系統(tǒng)操作說(shuō)明。
8.4. 定標(biāo):
8.4.1.
儀器通過(guò)掃描條碼卡自動(dòng)獲取測(cè)試所需的參數(shù)。
8.4.2. 如果特殊情況下儀器無(wú)法識(shí)別條碼卡,可以手工輸入。
8.4.3. 將校準(zhǔn)品轉(zhuǎn)移至樣本容器,放置在儀器配套樣本架中。
8.4.4. 裝載樣本架,在儀器軟件界面中輸入定標(biāo)信息。
14
8.4.5. 選擇“運(yùn)行”開(kāi)始測(cè)試,生成定標(biāo)曲線。
8.4.6. 定標(biāo)曲線有效期為 28 天。
8.4.7. 參考相應(yīng)的儀器系統(tǒng)操作說(shuō)明。
8.4.8. 出現(xiàn)以下情況需要進(jìn)行定標(biāo)曲線的重新生成:
8.4.8.1. 質(zhì)控結(jié)果經(jīng)重復(fù)測(cè)定后仍然超出范圍;
8.4.8.2. 試劑盒或發(fā)光底物液的批號(hào)更改;
8.4.8.3. 超出定標(biāo)曲線的有效期限;
8.4.8.4. 儀器重要部件更換或維修。
8.5. 質(zhì)控:
8.5.1. 使用至少兩個(gè)分析物水平的質(zhì)控品進(jìn)行質(zhì)控。
8.5.2.
出現(xiàn)以下情況需要進(jìn)行質(zhì)控:
8.5.2.1. 測(cè)試試劑盒使用超過(guò) 24 小時(shí);
8.5.2.2.
更換新的試劑盒;
8.5.2.3. 重新生成定標(biāo)曲線;
8.5.2.4. 停機(jī)。
8.5.3.
各實(shí)驗(yàn)室需根據(jù)自身情況建立適合本實(shí)驗(yàn)室的可接受范圍,以確
保合適的測(cè)試性能。
8.5.4. 質(zhì)控值應(yīng)落在規(guī)定的范圍內(nèi),如出現(xiàn)失控,應(yīng)采取糾正措施。
8.6. 稀釋
8.6.1. 使用手工稀釋或儀器自動(dòng)稀釋功能,儀器自動(dòng)稀釋的最大比例為
1:100。
8.6.2. 手工稀釋使用系統(tǒng)通用樣品稀釋液進(jìn)行稀釋,將得到的檢測(cè)結(jié)果
乘以稀釋倍數(shù)計(jì)算最終結(jié)果。
8.6.3. 選擇儀器自動(dòng)稀釋功能,可以得到準(zhǔn)確的檢測(cè)結(jié)果,參考相應(yīng)的
儀器系統(tǒng)操作說(shuō)明以及幫助系統(tǒng)。
8.7.結(jié)果計(jì)算:
選擇適當(dāng)?shù)那擬合方式,本試劑盒推薦采用四參數(shù)擬合方式,以校
準(zhǔn)品濃度值為 x 軸,以校準(zhǔn)品發(fā)光強(qiáng)度值的 log 值為 y 軸建立定標(biāo)曲線。
根據(jù)待測(cè)樣本的發(fā)光強(qiáng)度值回算相應(yīng)的濃度值。儀器自動(dòng)操作系統(tǒng)可通過(guò)
15
存儲(chǔ)的定標(biāo)曲線以及樣本測(cè)試得到的信號(hào)值自動(dòng)計(jì)算樣本測(cè)試結(jié)果。
九、參考范圍
檢測(cè) 500 例乙肝患者樣本和 500 例正常人樣本,用 ROC 曲線方法確定正
常參考值為<0.1PEI U/ml;建議各實(shí)驗(yàn)室根據(jù)自己實(shí)際條件及接觸人群建立
正常參考值。本試劑盒僅作為診斷的輔助手段之一,供臨床醫(yī)生參考。
十、檢驗(yàn)結(jié)果的解釋
10.1. 用本試劑盒檢測(cè)結(jié)果為參考值附近等可疑樣本,建議重新測(cè)定,動(dòng)態(tài)觀
察。
10.2. 由于方法學(xué)或免疫特異性等原因,使用不同生產(chǎn)商的試劑對(duì)同一份樣本
進(jìn)行檢測(cè)可能會(huì)得到不同的檢測(cè)結(jié)果,因此不同試劑檢測(cè)所得結(jié)果不應(yīng)
直接相互比較,以免造成錯(cuò)誤的醫(yī)學(xué)解釋,建議實(shí)驗(yàn)室在發(fā)給臨床醫(yī)生
的檢測(cè)報(bào)告中注明所用試劑特征。系列監(jiān)測(cè)中,如果改變?cè)噭╊愋,則
應(yīng)進(jìn)行額外的連續(xù)性檢測(cè)并與原有試劑結(jié)果進(jìn)行平行比較以重新確定
基線值。
10.3. 根據(jù) WHO 文獻(xiàn)報(bào)道 [4] ,1PEI U/ ml≈1.05IU/ml。
十一、檢驗(yàn)方法的局限性
11.1. 本產(chǎn)品檢測(cè)結(jié)果僅供臨床參考,不應(yīng)作為臨床診治的唯一依據(jù),對(duì)患
者的臨床管理應(yīng)結(jié)合其癥狀/體征、病史、其他實(shí)驗(yàn)室檢查、治療反
應(yīng)及流行病學(xué)等信息綜合考慮。
11.2. 樣本中的異嗜性抗體或類風(fēng)濕因子會(huì)干擾檢測(cè)結(jié)果,必須結(jié)合患者病
史,臨床檢查和其他臨床資料來(lái)綜合評(píng)估檢測(cè)結(jié)果。
11.3. 嚴(yán)重溶血、脂血或渾濁的樣本可能會(huì)造成不正確的檢測(cè)結(jié)果。
十二、產(chǎn)品性能特征
12.1. 陰性參考品符合率:符合中國(guó)食品藥品檢定研究院陰性參考品的要求;
12.2. 陽(yáng)性參考品符合率:符合中國(guó)食品藥品檢定研究院陽(yáng)性參考品的要求;
12.3. 最低檢出量:符合中國(guó)食品藥品檢定研究院最低檢出量參考品的要求;
12.4. 空白限:不大于 0.05PEI U/ml;
12.5. 線性:在 0.1~200PEI U/ml 范圍內(nèi),線性相關(guān)系數(shù) r≥0.9900;
12.6. 準(zhǔn)確性:測(cè)定結(jié)果在規(guī)定范圍內(nèi);
16
12.7. 分析特異性:與 HIV 抗體、HCV-IgG 抗體、HAV-IgM 抗體無(wú)交叉反應(yīng)。
12.8. 精密度:變異系數(shù)不高于 15.0%;
12.9. 干擾物質(zhì):40mg/dl 膽紅素、2.5mg/ml 血紅蛋白、500mg/dl 甘油三酯對(duì)
檢測(cè)結(jié)果無(wú)顯著影響;
12.10. 抗凝劑的影響:使用肝素抗凝的血漿對(duì)檢測(cè)結(jié)果無(wú)顯著影響;
12.11. HOOK 效應(yīng):測(cè)定含量為 1600PEI U/ml 的樣本,不會(huì)出現(xiàn) HOOK 效應(yīng);
12.12. 方法學(xué)對(duì)比:與 SFDA 批準(zhǔn)上市的試劑盒對(duì)比檢測(cè) 1119 份臨床樣本,
陰性符合率 100%,陽(yáng)性符合率 99.23%,總體符合率為 99.73%。
十三、參考文獻(xiàn)
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主題內(nèi)容 毒 乙型肝炎病毒 e 抗體 定量測(cè)定
17 一、 目的:規(guī)范 乙型肝炎病毒 e 抗體 測(cè)定的標(biāo)準(zhǔn)操作程序,確保 乙型肝炎病毒 e 抗體
測(cè)定的結(jié)果準(zhǔn)確有效。
二、 適用范圍:在 AutoLumo A2000 化學(xué)發(fā)光檢測(cè)儀上定量測(cè)定人血清中的 乙型肝炎病毒
e 抗體 。
三、臨床意義
乙型肝炎病毒(HBV)屬嗜肝 DNA 病毒科, 具有明顯的種屬及嗜肝特性
(盡管其亦可感染肝以外的組織、器官或細(xì)胞,如脾、睪丸、人外周血單個(gè)
核細(xì)胞等),可致持續(xù)性病毒感染。HBV 的感染導(dǎo)致血漿中出現(xiàn)特異性的乙
肝病毒 e 抗體及其它一系列特異性的血清學(xué)標(biāo)志物。e 抗體是乙型肝炎病毒
e 抗體的簡(jiǎn)稱(抗-HBe),它是由 e 抗原刺激人體免疫系統(tǒng)產(chǎn)生出來(lái)的特異
性抗體,這種特異的 e 抗體能夠和 e 抗原結(jié)合。
四、方法原理
本產(chǎn)品采用競(jìng)爭(zhēng)法原理進(jìn)行檢測(cè)。用 e 抗體和 e 抗原包被磁微粒,用辣
根過(guò)氧化物酶標(biāo)記 e 抗體制備酶結(jié)合物。通過(guò)免疫反應(yīng)形成抗體-抗原-酶標(biāo)抗
體復(fù)合物,該復(fù)合物催化發(fā)光底物發(fā)出光子,發(fā)光強(qiáng)度與 e 抗體的含量成反
比。
五、標(biāo)本的采集與處理
5.1. 采用正確醫(yī)用技術(shù)收集血清/血漿樣本,推薦對(duì)于使用普通管采血的樣
本,離心前樣本應(yīng) 37℃孵育至少 1h;對(duì)于使用促凝管采血的樣本,離心
前樣本應(yīng) 37℃孵育至少 0.5h,離心條件 10000g/min,10min;對(duì)于使用
抗凝管采血的樣本,離心條件 10000g/min,10min?鼓芡扑]使用肝
素鈉作為抗凝劑,避免使用枸櫞酸鈉和 EDTA 抗凝劑。
5.2. 樣本中的沉淀物和懸浮物可能會(huì)影響試驗(yàn)結(jié)果,應(yīng)離心除去,并確定樣
本未變質(zhì)方可使用。
5.3.
溶血或脂血的樣本不能用于測(cè)定。
5.4.
樣本收集后在室溫放置不可超過(guò) 8 小時(shí);如果不在 8 小時(shí)內(nèi)檢測(cè)需將樣
本放置在 2~8℃的冰箱中;若需 48 小時(shí)以上保存或運(yùn)輸,則應(yīng)凍存于
-20℃以下,避免反復(fù)凍融。使用前恢復(fù)到室溫,輕輕搖動(dòng)混勻。
六、標(biāo)本拒收標(biāo)準(zhǔn)
18
1)嚴(yán)重溶血、脂血
2)標(biāo)本標(biāo)識(shí)不明
七、儀器與材料
7.1.儀器:
適用于 AutoLumo A2000 化學(xué)發(fā)光檢測(cè)儀。
7.2.試劑:AutoLumo A2000 專用 乙型肝炎病毒 e 抗體 試劑
7.2.1.試劑準(zhǔn)備:本試劑為即用型試劑,可以直接放在儀器上。
7.2.2.試劑盒于 2~8℃儲(chǔ)存,有效期 12 個(gè)月。
7.2.3.試劑盒應(yīng)防止冷凍,避免強(qiáng)光照射。
7.2.4.試劑盒開(kāi)啟使用后,2~8℃保存可使用 1 個(gè)月。
7.2.5.試劑盒可適應(yīng) 1 周內(nèi)常溫運(yùn)輸,運(yùn)輸過(guò)程中應(yīng)輕拿輕放,避免重壓,防止雨雪淋濕和陽(yáng)光曝曬。
7.2.6.試劑機(jī)載穩(wěn)定性
7.2.6.1.
試劑包(磁微;鞈乙、酶結(jié)合物)豎直向上存放,
在 2 ~10°C 環(huán)境下冷藏保存 2 小時(shí)后,才可上機(jī)使
用。首次使用后,機(jī)載或在 2 ~10°C 環(huán)境下穩(wěn)定期
為 28 天。
7.2.6.2. 陰陽(yáng)性對(duì)照開(kāi)瓶后保存于2~8°C,穩(wěn)定期可維持1個(gè)
月;若需使用更長(zhǎng)時(shí)間,應(yīng)根據(jù)需要進(jìn)行分裝,于
-20℃凍存(可以保存2個(gè)月),但應(yīng)避免反復(fù)凍融。
7.2.6.3. 試劑在 2 ~8°C 保存可穩(wěn)定至標(biāo)簽上所標(biāo)示的有效
期。
7.3.質(zhì)控液:推薦使用安圖配套質(zhì)控品或第三方質(zhì)控品 BioRAD QC 八、檢驗(yàn)方法
8.1. 消耗品檢查:
8.1.1. 根據(jù)儀器說(shuō)明裝載或檢查消耗品是否充足。
8.1.2. 參考相應(yīng)的儀器系統(tǒng)操作說(shuō)明。
8.2. 試劑包裝載:
8.2.1. 試劑包首次上機(jī)前,輕輕地倒轉(zhuǎn)試劑包多次以混合新試劑包內(nèi)的成
份,避免產(chǎn)生氣泡。不要倒轉(zhuǎn)已經(jīng)打開(kāi)的試劑包。
8.2.2. 儀器通過(guò)掃描試劑包條碼自動(dòng)獲取測(cè)試所需的參數(shù)。
19
8.2.3.
如果特殊情況下儀器無(wú)法識(shí)別條碼,可以手工輸入。
8.2.4. 參考相應(yīng)的儀器系統(tǒng)操作說(shuō)明。
8.3. 測(cè)試:
8.3.1. 將樣本容器放置在儀器配套樣本架中,每次測(cè)試樣本量為 50µl。
8.3.2. 裝載樣本架,在儀器軟件界面中輸入樣本信息。
8.3.3. 選擇“運(yùn)行”開(kāi)始測(cè)試,系統(tǒng)自動(dòng)進(jìn)行試驗(yàn)操作。
8.3.4. 參考相應(yīng)的儀器系統(tǒng)操作說(shuō)明。
8.4. 定 Cutoff 值
8.4.1. 儀器通過(guò)掃描條碼卡自動(dòng)獲取測(cè)試所需的參數(shù)。
8.4.2. 如果特殊情況下儀器無(wú)法識(shí)別條碼卡,可以手工輸入。
8.4.3. 將陰陽(yáng)性對(duì)照轉(zhuǎn)移至樣本容器,放置在儀器配套樣本架中。
8.4.4. 裝載樣本架,在儀器軟件界面中輸入 Cutoff 值信息。
8.4.5.
選擇“運(yùn)行”開(kāi)始測(cè)試,生成 Cutoff 值。
8.4.6. Cutoff 值有效期為 28 天。
8.4.7. 參考相應(yīng)的儀器系統(tǒng)操作說(shuō)明。
8.4.8. 出現(xiàn)以下情況需要重新生成 Cutoff 值:
8.4.8.1. 質(zhì)控結(jié)果經(jīng)重復(fù)測(cè)定后仍然超出范圍;
8.4.8.2. 試劑盒或發(fā)光底物液的批號(hào)更改;
8.4.8.3.超出 Cutoff 值有效期限;
8.4.8.4.
儀器重要部件更換或維修。
8.5. 質(zhì)控:
8.5.1. 使用至少兩個(gè)分析物水平的質(zhì)控品進(jìn)行質(zhì)控。
8.5.2.
出現(xiàn)以下情況需要進(jìn)行質(zhì)控:
8.5.2.1. 測(cè)試試劑盒使用超過(guò) 24 小時(shí);
8.5.2.2. 更換新的試劑盒;
8.5.2.3. 重新生成 Cutoff 值;
8.5.2.4 停機(jī)。
8.5.3. 各實(shí)驗(yàn)室需根據(jù)自身情況建立適合本實(shí)驗(yàn)室的可接受范圍,以確
保合適的測(cè)試性能。
20
8.5.4. 質(zhì)控值應(yīng)落在規(guī)定的范圍內(nèi),如出現(xiàn)失控,應(yīng)采取糾正措施。
8.6.結(jié)果計(jì)算:
Cutoff 值=陰性對(duì)照平均發(fā)光值*0.4
有效性判斷:
8.6.1.
陰性對(duì)照孔平均發(fā)光值/陽(yáng)性對(duì)照孔平均發(fā)光值大于 3;
8.6.2. 陰性對(duì)照各孔相對(duì)發(fā)光強(qiáng)度 CV%不超過(guò) 10%(如 CV%超過(guò)
10%,則刪除不平行點(diǎn)直到 CV%小于 10%或重新實(shí)驗(yàn))。
九、參考范圍
S/CO=待測(cè)樣本發(fā)光值/ Cutoff 值;
當(dāng) S/CO>1.00 時(shí),結(jié)果判為陰性;S/CO≤1.00 時(shí),結(jié)果判為陽(yáng)性。
十、 檢驗(yàn)結(jié)果的解釋
10.1. 用本試劑盒檢測(cè)結(jié)果 COI 為 0.80~1.20 的弱反應(yīng)性可疑樣本,建議復(fù)
孔重新測(cè)定,如果雙孔復(fù)查 COI 均大于 1.00,結(jié)果判為陰性,如果單
孔或復(fù)孔測(cè)定不大于 1.00,結(jié)果判為陽(yáng)性,同時(shí)建議動(dòng)態(tài)觀察。
10.2. 由于方法學(xué)或免疫特異性等原因,使用不同生產(chǎn)商的試劑對(duì)同一份樣本
進(jìn)行檢測(cè)可能會(huì)得到不同的檢測(cè)結(jié)果,因此不同試劑檢測(cè)所得結(jié)果不應(yīng)
直接相互比較,以免造成錯(cuò)誤的醫(yī)學(xué)解釋,建議實(shí)驗(yàn)室在檢測(cè)報(bào)告中注
明所用試劑特征。系列監(jiān)測(cè)中,如果改變?cè)噭╊愋,則應(yīng)進(jìn)行額外的連
續(xù)性檢測(cè)并與原有試劑結(jié)果進(jìn)行平行比較以重新確定基線值。
十一、檢驗(yàn)方法的局限性
11.1. 本試劑盒僅作為診斷的輔助手段之一,臨床診斷應(yīng)與臨床檢查、病史
及其他檢測(cè)相結(jié)合。
11.2. 樣本中的異嗜性抗體或類風(fēng)濕因子會(huì)干擾檢測(cè)結(jié)果。此類樣本不適
合用本試劑盒進(jìn)行檢測(cè)。
11.3. 溶血、脂血或渾濁的樣本可能會(huì)造成不正確的檢測(cè)結(jié)果。
十二、產(chǎn)品性能特征
12.1.
符合率:與 SFDA 批準(zhǔn)的試劑平行檢測(cè) 1024 份臨床樣本,陰性符合率
98.98%,陽(yáng)性符合率 98.8%,總符合率 98.93%。
12.2.
最低檢出限:檢定系列國(guó)家最低檢出限參考品或經(jīng)國(guó)家參考品標(biāo)化的企
21
業(yè)最低檢出限參考品,結(jié)果符合相應(yīng)參考品的要求。
12.3.
精密性:10 孔平行檢測(cè) 0.5 PEI U/ml 樣本,CV%≤10.0%;10 孔平行
檢測(cè) 5 PEI U/ml 樣本,CV%≤20.0%。
12.4. 分析特異性:與抗-HIV(1+2)、抗-HCV、抗-HAV 等病毒性抗體無(wú)交
叉反應(yīng)。1.25mg/ml 血紅蛋白、200mg/L 膽紅素、20g/L 甘油三酯和
500mg/dl 膽固醇對(duì)檢測(cè)結(jié)果無(wú)干擾。
十三、參考文獻(xiàn)
1.Lok ASE, McMahon BJ. AASLD practice guidelines:chronic hepatitis B.
Hepatology, 2004, 34: 1225-1241.
2.Lavanchy D. Hepatitis B virus epidemiology, disease burden, treatment, and current and emerging prevention and control measures. J Viral Hepat, 2004, 11:
97-107.
3.巴德年,1998 年.當(dāng)代免疫學(xué)技術(shù)與應(yīng)用.北京醫(yī)科大學(xué)中國(guó)協(xié)和醫(yī)科大學(xué)聯(lián)
合出版社.
4.陶義訓(xùn), 1997 年第二版,免疫學(xué)與免疫學(xué)檢驗(yàn).人民衛(wèi)生出版社.
5.中華醫(yī)學(xué)會(huì)傳染病與寄生蟲(chóng)病學(xué)分會(huì)、肝病學(xué)分會(huì). 病毒性肝炎防治方案.
中華傳染病雜志, 2001, 19:56-62.
22
主題內(nèi)容 乙型肝炎病毒核心 抗體 定量測(cè)定
一、 目的:規(guī)范 乙型肝炎病毒核心抗體 測(cè)定的標(biāo)準(zhǔn)操作程序,確保 乙型肝炎病毒核心
抗體 測(cè)定的結(jié)果準(zhǔn)確有效。
二、 適用范圍:在 AutoLumo A2000 化學(xué)發(fā)光檢測(cè)儀上定量測(cè)定人血清中的 乙型肝炎病毒
核心抗體 。
三、臨床意義
核心抗體是乙型肝炎病毒核心抗體的簡(jiǎn)稱,可簡(jiǎn)寫(xiě)為抗-HBc。核心抗原
雖然在血清中查不出來(lái)(它在血中很快被裂解),但是它具有抗原性,能刺激
身體的免疫系統(tǒng)產(chǎn)生出特性抗體,即核心抗體,故檢測(cè)抗-HBc 可以了解人體
是否有過(guò)核心抗原的刺激,也就是說(shuō)是否有過(guò)乙肝病毒的感染。所以抗-HBc
是一項(xiàng)病毒感染的標(biāo)志。
四、方法原理
本產(chǎn)品采用競(jìng)爭(zhēng)法原理進(jìn)行檢測(cè)。用核心抗原包被磁微粒,用辣根過(guò)氧
化物酶標(biāo)記核心抗體制備酶結(jié)合物。通過(guò)免疫反應(yīng)形成抗原-酶標(biāo)抗體復(fù)合
物,該復(fù)合物催化發(fā)光底物發(fā)出光子,發(fā)光強(qiáng)度與核心抗體的含量成反比。
五、標(biāo)本的采集與處理
5.1. 采用正確醫(yī)用技術(shù)收集血清/血漿樣本,推薦對(duì)于使用普通管采血的樣
本,離心前樣本應(yīng) 37℃孵育至少 1h;對(duì)于使用促凝管采血的樣本,離心
前樣本應(yīng) 37℃孵育至少 0.5h,離心條件 10000g/min,10min;對(duì)于使用
抗凝管采血的樣本,離心條件 10000g/min,10min?鼓芡扑]使用肝
素鈉作為抗凝劑,避免使用枸櫞酸鈉和 EDTA 抗凝劑。
23 5.2. 樣本中的沉淀物和懸浮物可能會(huì)影響試驗(yàn)結(jié)果,應(yīng)離心除去,并確定樣
本未變質(zhì)方可使用。
5.3. 溶血或脂血的樣本不能用于測(cè)定。
5.4. 樣本收集后在室溫放置不可超過(guò) 8 小時(shí);如果不在 8 小時(shí)內(nèi)檢測(cè)需將樣
本放置在 2~8℃的冰箱中;若需 48 小時(shí)以上保存或運(yùn)輸,則應(yīng)凍存于
-20℃以下,避免反復(fù)凍融。使用前恢復(fù)到室溫,輕輕搖動(dòng)混勻。
六、標(biāo)本拒收標(biāo)準(zhǔn)
1)嚴(yán)重溶血、脂血
2)標(biāo)本標(biāo)識(shí)不明
七、儀器與材料
7.1.儀器:
適用于 AutoLumo A2000 化學(xué)發(fā)光檢測(cè)儀。
7.2.試劑:AutoLumo A2000 專用 乙型肝炎病毒核心抗體 試劑
7.2.1.試劑準(zhǔn)備:本試劑為即用型試劑,可以直接放在儀器上。
7.2.2.試劑盒于 2~8℃儲(chǔ)存,有效期 12 個(gè)月。
7.2.3.試劑盒應(yīng)防止冷凍,避免強(qiáng)光照射。
7.2.4.試劑盒開(kāi)啟使用后,2~8℃保存可使用 1 個(gè)月。
7.2.5.試劑盒可適應(yīng) 1 周內(nèi)常溫運(yùn)輸,運(yùn)輸過(guò)程中應(yīng)輕拿輕放,避免重壓,防止雨雪淋濕和陽(yáng)光曝曬。
7.2.6.試劑機(jī)載穩(wěn)定性
7.2.6.1. 試劑包(磁微;鞈乙、酶結(jié)合物)豎直向上存放,
在 2~10°C 環(huán)境下冷藏保存 2 小時(shí)后,才可上機(jī)使
用。首次使用后,機(jī)載或在 2~10°C 環(huán)境下穩(wěn)定期
為 28 天。
7.2.6.2. 陰陽(yáng)性對(duì)照開(kāi)瓶后保存于2~8°C,穩(wěn)定期可維持1
個(gè)月;若需使用更長(zhǎng)時(shí)間,應(yīng)根據(jù)需要進(jìn)行分裝,
于-20℃凍存(可以保存2個(gè)月),但應(yīng)避免反復(fù)凍
融。
7.3.質(zhì)控液:推薦使用安圖配套質(zhì)控品或第三方質(zhì)控品 BioRAD QC 八、檢驗(yàn)方法
8.1. 消耗品檢查:
24
8.1.1. 根據(jù)儀器說(shuō)明裝載或檢查消耗品是否充足。
8.1.2. 參考相應(yīng)的儀器系統(tǒng)操作說(shuō)明。
8.2. 試劑包裝載:
8.2.1. 試劑包首次上機(jī)前,輕輕地倒轉(zhuǎn)試劑包多次以混合新試劑包內(nèi)的成
份,避免產(chǎn)生氣泡。不要倒轉(zhuǎn)已經(jīng)打開(kāi)的試劑包。
8.2.2. 儀器通過(guò)掃描試劑包條碼自動(dòng)獲取測(cè)試所需的參數(shù)。
8.2.3. 如果特殊情況下儀器無(wú)法識(shí)別條碼,可以手工輸入。
8.2.4.
參考相應(yīng)的儀器系統(tǒng)操作說(shuō)明。
8.3. 測(cè)試:
8.3.1. 將樣本容器放置在儀器配套樣本架中,每次測(cè)試樣本量為 50µl。
8.3.2. 裝載樣本架,在儀器軟件界面中輸入樣本信息。
8.3.3. 選擇“運(yùn)行”開(kāi)始測(cè)試,系統(tǒng)自動(dòng)進(jìn)行...
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