摘要：以煙葉唇柱苣苔無菌葉片為試驗(yàn)材料，研究培養(yǎng)基pH值、無機(jī)鹽濃度、蔗糖濃度、植物生長(zhǎng)調(diào)節(jié)劑種類及配比等對(duì)不定芽誘導(dǎo)的影響，以期篩選出最佳誘導(dǎo)培養(yǎng)基。結(jié)果表明：不定芽誘導(dǎo)的最佳培養(yǎng)基為MS+6-BA0.5mg/L+NAA0.1mg/L+蔗糖30g/L，滅菌前pH值為6.0，40d不定芽誘導(dǎo)率為100%，不定芽數(shù)平均為9.58個(gè)/張，生長(zhǎng)勢(shì)好。
　　關(guān)鍵詞：煙葉唇柱苣苔；葉片；不定芽；組織培養(yǎng)
　　中圖分類號(hào)：Q943.1文獻(xiàn)標(biāo)志碼：A文章編號(hào)：1002-1302（2014）11-0075-03
　　苦苣苔科植物具有極重要的生物學(xué)價(jià)值和分類意義[1]，其種類繁多，全世界約有150屬3000余種，我國(guó)有58屬約463種[2]，其中海南省約有13屬21種1變種，而特有種10種[3]�？嘬奶�科植物中許多種類是重要的觀賞植物、藥用植物和特種蔬菜資源。煙葉唇柱苣苔（Chiritaheterotricha）是苦苣苔科唇柱苣苔屬多年生草本植物，生于海拔約430m的山谷林中或溪邊石上，是海南特有的野生花卉，其花冠淡紫色或白色，極為優(yōu)雅，而且花期長(zhǎng)，四季長(zhǎng)綠，適合觀賞和園藝。此外，唇柱苣苔屬植物具有廣泛的適應(yīng)性[4]，因而煙葉唇柱苣苔具有極大的開發(fā)潛力。目前，煙葉唇柱苣苔仍處于野生狀態(tài)，未進(jìn)行商品化開發(fā)。由于人類活動(dòng)的干擾、生態(tài)環(huán)境惡化以及自身的原因，煙葉唇柱苣苔資源逐漸減少，因此極有必要進(jìn)行組織培養(yǎng)研究，以滿足煙葉唇柱苣苔的保護(hù)和開發(fā)利用的需要。本試驗(yàn)以煙葉唇柱苣苔無菌葉片作為材料，較系統(tǒng)地研究葉片分化不定芽過程中的若干影響因素，以期篩選出最佳的不定芽誘導(dǎo)培養(yǎng)條件，快速建立煙葉唇柱苣苔組培技術(shù)體系。
　　1材料與方法
　　1.1試驗(yàn)材料
　　植株采自海南省保亭縣。取幼葉進(jìn)行表面消毒后培養(yǎng)獲得的無菌葉片作為試驗(yàn)材料。
　　1.2試驗(yàn)方法
　　在基本培養(yǎng)基中添加不同種類和濃度的植物生長(zhǎng)調(diào)節(jié)劑，除試驗(yàn)項(xiàng)目以外，所有處理中的基本培養(yǎng)基中含食用蔗糖30g/L、卡拉膠9g/L，滅菌前pH值為6.0，光照強(qiáng)度1500lx，光照時(shí)間9h/d，培養(yǎng)溫度（26±2）℃。取無菌植株小葉片（約0.5cm×0.5cm），以葉面朝上接種于各種培養(yǎng)基上（圖1），每個(gè)處理接種8袋，每袋3張葉，3次重復(fù)，定期觀察并記錄，培養(yǎng)40d后統(tǒng)計(jì)葉片不定芽誘導(dǎo)率和平均不定芽數(shù)。不定芽誘導(dǎo)率=誘導(dǎo)出芽葉片數(shù)/接種葉片數(shù)×100%，平均不定芽數(shù)=不定芽總數(shù)/誘導(dǎo)出芽葉片數(shù)。
　　1.2.1不同接種方式對(duì)不定芽誘導(dǎo)的影響以MS+6-BA0.1mg/L+NAA0.1mg/L為基本培養(yǎng)基，接種葉片分別以葉背和葉面平放于培養(yǎng)基上，共2種處理。
　　1.2.2pH值對(duì)不定芽誘導(dǎo)的影響以MS+6-BA0.1mg/L+NAA0.1mg/L為基本培養(yǎng)基，滅菌前pH值分別調(diào)至5.0、5.5、6.0、6.5、7.0，共5個(gè)處理。
　　1.2.3無機(jī)鹽濃度對(duì)不定芽誘導(dǎo)的影響以1/4MS、2/4MS、3/4MS、MS作為基本培養(yǎng)基，各添加6-BA0.1mg/L+NAA0.1mg/L，共4個(gè)處理。
　　1.2.4不同種類細(xì)胞分裂素對(duì)不定芽誘導(dǎo)的影響以MS+NAA0.1mg/L為基本培養(yǎng)基，分別添加6-BA0.1mg/L、KT0.1mg/L和TDZ0.1mg/L，共3個(gè)處理。
　　1.2.5蔗糖濃度對(duì)不定芽誘導(dǎo)的影響以MS+6-BA0.1mg/L+NAA0.1mg/L為基本培養(yǎng)基，設(shè)置蔗糖濃度10、20、30、40、50g/L共5個(gè)處理。
　　1.2.6不同植物生長(zhǎng)調(diào)節(jié)劑組合對(duì)不定芽誘導(dǎo)的影響以MS為基本培養(yǎng)基，設(shè)計(jì)6-BA0.1、0.5、1.0mg/L與NAA0.1、0.5mg/L不同配比，共6個(gè)處理。
　　1.3數(shù)據(jù)分析
　　采用方差分析法，F(xiàn)測(cè)驗(yàn)顯著后用新復(fù)極差法進(jìn)行多重比較。
　　2結(jié)果與分析
　　2.1不同接種方式對(duì)不定芽誘導(dǎo)的影響
　　煙葉唇柱苣苔葉片幾乎無明顯的愈傷組織分化，可以直接分化出不定芽。接種15d后，葉面開始膨大隆起，25d開始有小芽點(diǎn)萌動(dòng)，40d在葉片邊緣、主葉脈基部和葉面處均分化出不定芽。從表1可見，以葉背和葉面2種方式接種培養(yǎng)的結(jié)果差異極大，以葉背接觸培養(yǎng)基的葉片不定芽誘導(dǎo)率高達(dá)100%，平均不定芽數(shù)為7.22個(gè)/張；而葉面接觸培養(yǎng)基的不定芽誘導(dǎo)率只有73.91%，平均不定芽數(shù)為4.76個(gè)/張。方差分析結(jié)果表明，2種接種方式不定芽誘導(dǎo)率和平均不定芽數(shù)的差異均達(dá)到極顯著水平，因此煙葉唇柱苣苔葉片不定芽的誘導(dǎo)以葉背平置于培養(yǎng)基上為宜。
　　2.2pH值對(duì)不定芽誘導(dǎo)的影響
　　由表2可知，pH值為6.0的培養(yǎng)基上不定芽的誘導(dǎo)率和平均不定芽數(shù)最高，分別為100%和7.34個(gè)/張；其次為pH值為6.5的培養(yǎng)基，其不定芽誘導(dǎo)率和平均不定芽數(shù)分別為96.30%和6.07個(gè)/張；最低的為pH值為5.0的培養(yǎng)基，其不定芽誘導(dǎo)率和平均不定芽數(shù)分別為79.17%和4.01個(gè)/張。經(jīng)方差分析可知，pH值為6.0的培養(yǎng)基與其他培養(yǎng)基處理的不定芽誘導(dǎo)率和平均不定芽數(shù)的差異極顯著，因此煙葉唇柱苣苔不定芽誘導(dǎo)培養(yǎng)基的pH值在滅菌前宜調(diào)至6.0。
　　2.3無機(jī)鹽濃度對(duì)不定芽誘導(dǎo)的影響
　　從表3可見，除1/4MS外，其余3種無機(jī)鹽濃度對(duì)葉片不定芽的誘導(dǎo)率均能達(dá)到100%，而平均不定芽數(shù)則隨著無機(jī)鹽濃度的增加而增加，呈正相關(guān)關(guān)系。MS對(duì)葉片不定芽的誘導(dǎo)效果最好，平均不定芽數(shù)最多，達(dá)7.23個(gè)/張，與其他處理差異極顯著，且芽苗生長(zhǎng)健壯，葉色濃綠；3/4MS的誘導(dǎo)效果次之，分化芽數(shù)為6.18個(gè)/張，芽生長(zhǎng)勢(shì)也好，葉綠色；1/2MS和1/4MS誘導(dǎo)的平均不定芽數(shù)差異不顯著，但1/4MS誘導(dǎo)的不定芽生長(zhǎng)勢(shì)差，部分葉片出現(xiàn)黃化現(xiàn)象。說明全量MS培養(yǎng)基適合煙葉唇柱苣苔不定芽誘導(dǎo)培養(yǎng)。

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