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RP-HPLC-ELSD法測定野生白花丹藥材1~12月份根、莖、葉中β-谷甾醇的含量

發(fā)布時(shí)間:2019-08-27 來源: 美文摘抄 點(diǎn)擊:


  摘要:目的:測定野生白花丹藥材1~12月份根、莖、葉中β-谷甾醇的含量。方法:采用HPLC-ELSD法測定白花丹中β-谷甾醇的含量。色譜條件為:流動(dòng)相為純甲醇;色譜柱為迪馬C18柱(250 mm×4.6 mm,5 μm);流速為1.0 mL/min;柱溫25 ℃;蒸發(fā)光散射檢測器檢測參數(shù)為漂移管溫度65 ℃,載氣(N2)流速為2.5 L/min。結(jié)果:白花丹葉中β-谷甾醇的含量最高,其次是莖,根中含量最少;3、5、7、8月份采收的藥材中含量最高,11、12月最低。結(jié)論:以β-谷甾醇為主要成分指標(biāo)時(shí)最佳入藥部位為葉,最佳采收期在3、5、7、8月份。
  關(guān)鍵詞:野生白花丹;β-谷甾醇;含量測定;RP-HPLC-ELSD
  中圖分類號(hào):R284文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼:B
  文章編號(hào):1007-2349(2012)02-0055-02
  
  白花丹是雙子葉植物藍(lán)雪科植物白雪花(Plumbago zeylanica L.)的全草[1]。為多民族醫(yī)常用藥材,民間應(yīng)用廣泛,具有散瘀消腫、祛風(fēng)止痛等功效[1]。收載于1996年版《廣西中藥材標(biāo)準(zhǔn)》第二冊和1998年版國家衛(wèi)生部部頒維藥標(biāo)準(zhǔn)。文獻(xiàn)資料及本課題組前期的研究表明,白花丹具有抗腫瘤、抗炎、抗肝損傷等藥理作用[2~8]。目前國內(nèi)外日益重視白花丹藥材的應(yīng)用和開發(fā),除有效成分白花丹醌外,對其有效成分β-谷甾醇的研究報(bào)道較少。本實(shí)驗(yàn)擬對野生白花丹藥材1~12月份的根、莖、葉中的β-谷甾醇含量進(jìn)行測定,以期為白花丹野生變家種提供有用的實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)。
  1實(shí)驗(yàn)材料
  1.1儀器Waters 2695系列高效液相色譜儀(Waters公司),Empower色譜工作站,浙江大學(xué)N2000色譜工作站,Sedex-75型蒸發(fā)光散射檢測器(奧泰公司);色譜柱為迪馬C18柱(250 mm×4.6 mm,5 μm)。RE-52A型旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)器。METTLER AE 240雙量程分析天平。
  1.2試藥β-谷甾醇對照品(成都市藥檢所,供含量測定用);甲醇為色譜純;所用提取試劑均為分析純。
  1.3藥材實(shí)驗(yàn)所用藥材樣品采自于白花丹最適產(chǎn)地云南西雙版納(中國醫(yī)學(xué)科學(xué)院藥用植物研究所南藥園),經(jīng)西南民族大學(xué)劉圓教授鑒定。
  2實(shí)驗(yàn)方法與結(jié)果
  2.1色譜條件色譜柱為迪馬C18柱(250 mm×4.6 mm,5 μm);流動(dòng)相為純甲醇;流速為1.0 mL/min;柱溫25 ℃;蒸發(fā)光散射檢測器檢測參數(shù)為漂移管溫度65 ℃,N2流速為2.5 L•min-1。色譜圖見圖1~圖2。
  圖1β-谷甾醇對照品HPLC色譜圖(A)
  圖2樣品HPLC色譜圖(B)
  2.2對照品溶液的制備精密稱取β-谷甾醇對照品10.3 mg,用甲醇溶解于50 mL容量瓶中,制成0.103 mg/mL的溶液作為對照品。
  2.3樣品溶液的制備精密稱取白花丹藥材樣品約3 g,置于索氏提取器中,精密加入150 mL的甲醇溶液,索氏提取3 h,取出放冷,揮去溶劑,用甲醇溶解于25 mL容量瓶中,加甲醇稀釋至刻度,搖勻,即得。
  2.4方法學(xué)考察
  2.4.1標(biāo)準(zhǔn)曲線的制備分別精密吸取β-谷甾醇對照品溶液,依選定色譜條件,測定不同進(jìn)樣量下β-谷甾醇的峰面積值,得回歸方程為:Y=1.500 5 X+5.683 6,r=0.998(n=6)。表明β-谷甾醇在0.103~2.575 μg范圍內(nèi)與峰面積值線性關(guān)系良好。
  2.4.2精密度試驗(yàn)分別精密吸取β-谷甾醇10 μL,各重復(fù)進(jìn)樣6次,得RSD為0.015%,結(jié)果表明精密度良好。
  2.4.3穩(wěn)定性試驗(yàn)取同一樣品根溶液20 μL,按選定色譜條件下于0、2、4、6、8 h測定樣品溶液中β-谷甾醇峰面積值,得RSD為0.029%,表明樣品穩(wěn)定性良好。
  2.4.4重復(fù)性試驗(yàn)分別精密取同一白花丹根藥材6份,各約3 g,按樣品溶液制備項(xiàng)下方法制備樣品,按照選定的色譜條件測定6份樣品溶液中β-谷甾醇的含量,得RSD為1.284%。
  2.4.5加樣回收率試驗(yàn)精確稱取已知含量的白花丹藥材9份,各約3.0 g,分別加入濃度為0.131 mg/mL β-谷甾醇對照品溶液,按樣品溶液制備方法制備并測定,結(jié)果見表1。
  表1β-谷甾醇加樣回收率試驗(yàn)結(jié)果(n=9)
  序號(hào)樣品含量
 。╩g)加入量
 。╩g)測得量
  (mg)回收率
 。%)平均回收
  率(%)RSD
 。%)11.89980.73302.635598.8621.89990.73302.635999.9731.89960.73302.635899.0241.89761.45203.3548100.2551.90071.45203.355598.99100.060.634061.89241.45203.336399.6171.90262.15504.0775100.5981.90092.15504.032299.2491.89452.15504.0694100.522.5樣品含量測定取白花丹野生1~12月份藥材根、莖、葉按2.3項(xiàng)下樣品溶液的制備方法制備,進(jìn)樣量為10 μL,測定β-谷甾醇的含量,結(jié)果見表2。
  表21~12月份根、莖、葉中β-谷甾醇的含量(n=3)
  月份部位β-谷甾醇的含量
 。%)月份部位β-谷甾醇的含量
 。%)根0.06327根0.05811莖0.0631莖0.0605葉0.1092葉0.1297根0.04188根0.06082莖0.0595莖0.0596葉0.1244葉0.1207根0.04589根0.01123莖0.0874莖0.0738葉0.1367葉0.0898根0.064610根04莖0.0618莖0.0526葉0.0997葉0.1086根0.062811根0.06815莖0.0673莖0葉0.1251葉0.0621根0.048712根0.03786莖0.0621莖0.0435葉0.0842葉0.04243小結(jié)與討論
  野生白花丹1~12月份藥材根中β-谷甾醇含量變化范圍為0 %~0.0681 %,莖中β-谷甾醇含量變化范圍為0 %~0.0874 %,葉中β-谷甾醇含量變化范圍為0.0424 %~0.1367 %。白花丹藥材中β-谷甾醇含量在葉中含量最高,根中含量最低或未檢出,說明有些少數(shù)民族地區(qū)采用葉來抗炎、消腫是有科學(xué)依據(jù)的。野生白花丹葉可作為再生資源。由含量變化可看出β-谷甾醇含量在3、5、7、8月份最高,冬季含量最低。
  
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 。ㄊ崭迦掌冢2011-10-14)

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