HPLC法測(cè)定60℃烘烤前后滇重樓藥材四種皂苷的含量變化?
發(fā)布時(shí)間:2019-08-29 來源: 日記大全 點(diǎn)擊:
摘要:目的分析測(cè)定經(jīng)過60℃烘烤前后滇重樓中重樓皂苷Ⅰ、Ⅱ、Ⅵ、Ⅶ的含量變化。方法采用HPLC法,色譜柱為WatersSunFire-C18(4.6 mm×150 mm,5μm),流動(dòng)相為乙腈-水為流動(dòng)相,梯度洗脫;進(jìn)樣量10 μL,柱溫30℃,檢測(cè)波長203 nm。結(jié)果8個(gè)不同產(chǎn)地的滇重樓藥材,經(jīng)過60℃烘烤前后滇重樓中重樓皂苷Ⅰ、Ⅱ、Ⅵ、Ⅶ的總量變化有差異,其中四種皂苷總量及重樓皂苷Ⅰ含量明顯降低。結(jié)論經(jīng)過60℃烘烤后對(duì)滇重樓的品質(zhì)有影響。
關(guān)鍵詞:滇重樓;重樓皂苷;含量變化;高效液相色譜法
中圖分類號(hào):R284.1文獻(xiàn)標(biāo)志碼:A文章編號(hào):1007-2349(2016)05-0049-03
重樓首載于《滇南本草》,為重樓屬植物,學(xué)名為[Paris polyphylla var.yunnanensis(Franch.)Hand.-Mazz.],現(xiàn)稱滇重樓。在云南的別名為土三七、七葉一枝花、重樓、大重樓、重臺(tái)、兩把傘、獨(dú)角蓮(滇南本草),根莖入藥,有消腫解毒,止血止痛,利小便之功能[1-2]。滇重樓是中成藥,如云南白藥、季德勝蛇藥片、宮血寧膠囊、樓蓮膠囊、熱毒清膠囊等的主要原料之一[3]-4]。甾體皂苷是重樓的主要活性成分,并含有氨基酸、甾酮、蛻皮激素、黃酮苷等化合物,具有止血、抗菌、抗腫瘤、免疫調(diào)節(jié)、鎮(zhèn)痛和鎮(zhèn)靜等作用。甾體皂苷:按苷元的不同主要有兩類,一類為薯蕷皂苷元(diosgenin)的糖苷,另一類為偏諾皂苷元(pennogenin)的糖苷,重樓皂苷中屬于薯蕷皂苷元的有重樓皂苷I、重樓皂苷Ⅱ、重樓皂苷Ⅵ,屬于偏諾皂苷元的有重樓皂苷Ⅶ[3,5],F(xiàn)采用HPLC測(cè)定經(jīng)過60℃烘烤不同產(chǎn)地的滇重樓藥材中重樓皂苷Ⅰ、Ⅱ、Ⅵ、Ⅶ的含量變化,為評(píng)價(jià)其內(nèi)在質(zhì)量、臨床藥理研究及產(chǎn)地加工提供理論參考。
1實(shí)驗(yàn)部分
1.1儀器和試藥
1.1.1儀器Waters e2695高效液相色譜儀系統(tǒng)(美國Waters)、AG285型電子天平(瑞士Mettler-Toledo 公司)、DHG-9031A型電熱恒溫干燥箱(上海精宏實(shí)驗(yàn)設(shè)備有限公司)。
1.1.2試劑重樓皂苷Ⅰ、Ⅱ、Ⅵ、Ⅶ對(duì)照品(中國藥品生物制品檢定所,批號(hào)分別為:111590-200402,111591-201103,111592-201203,111593-200402);乙腈為色譜純(德國默克公司),甲醇為分析純,水為超純水。
1.1.3藥材采集8個(gè)不同產(chǎn)地滇重樓藥材,均為栽培品種,產(chǎn)地分別為:大理九頂山、新平縣嘎灑鎮(zhèn)、云龍縣白石鎮(zhèn)、云龍縣關(guān)坪鄉(xiāng)、耿馬縣大興鄉(xiāng)、蒙自冷泉鎮(zhèn)、馬關(guān)縣南撈鄉(xiāng)、祿勸縣撒營盤鄉(xiāng)(見表1),經(jīng)云南省藥物所究所天然藥物資源研究中心高級(jí)工程師戚育芳鑒定為為百合科植物云南重樓[P.polyphylla var.yunnanensis(Fr.)Hand.-Mazz.]的干燥根莖。
1.2方法與結(jié)果
1.2.1色譜條件及系統(tǒng)適用性色譜柱為(WatersSunFire-C18,4.6 mm×150 mm,5 μm);流動(dòng)相:乙腈(A)-水(B),梯度洗脫(流動(dòng)相A 0→40 min,30%→70%;40→50 min,60%→40%),流速:1.0 min·mL-1,進(jìn)樣量:10 μL,柱溫30℃,檢測(cè)波長203 nm。在此色譜條件下,理論板數(shù)按重樓皂苷Ⅰ峰計(jì)算不低于4000。
1.2.2標(biāo)準(zhǔn)品溶液的制備取重樓皂苷Ⅰ、Ⅱ、Ⅵ、Ⅶ對(duì)照品適量,精密稱定,加甲醇分別制成濃度為0.4110、0.3950、0.4300、0.4380 mg/mL的溶液,即得對(duì)照品混合溶液。
1.2.3樣品的制備將清洗前后各8個(gè)不同產(chǎn)地的滇重樓藥材,每一批號(hào)的樣品先用鐵錘敲小平均分為2份,一份直接用萬能粉碎機(jī)打粉,過3號(hào)篩;另一份用自來水清洗3遍,裝于鐵絲網(wǎng)篩中濾干水分后放入電熱恒溫干燥箱中,60℃恒溫干燥24 h,放冷后用萬能粉碎機(jī)打粉,過三號(hào)篩備用,同時(shí)測(cè)定水分含量。取約0.5 g 重樓藥材粉末(過三號(hào)篩),精密稱定,置具塞錐形瓶中,精密加入乙醇25 mL,稱定重量,加熱回流30 min,放冷,再稱定重量,用乙醇補(bǔ)足減失的重量,搖勻,濾過,取續(xù)濾液,即得。
1.2.4線性關(guān)系考察精密吸取對(duì)照品混合溶液2、5、10、15、20、25、30 μL分別進(jìn)樣,記錄色譜圖,測(cè)定峰面積。以進(jìn)樣量為橫坐標(biāo),峰面積為縱坐標(biāo),進(jìn)行線性回歸。重樓皂苷Ⅰ、Ⅱ、Ⅵ、Ⅶ的回歸方程分別為:YⅠ=145362XⅠ+20908(r=0.9995);YⅡ=280662XⅡ-15056(r=0.9993);YⅥ=370123XⅥ+10054(r=0.9996);YⅦ=254145XⅦ+13908(r=0.9995)。線性范圍分別為2.1222~12.1000、2.1014~13.7500、1.6455~14.5000、1.8805~12.6600 μg。
1.2.5儀器精密度試驗(yàn)精密吸取對(duì)照品混合溶液10μl,按“1.2.1”項(xiàng)下條件連續(xù)進(jìn)樣5次,各成分峰面積的RSD分別為0.98%、1.17%、1.02%、0.88%。表明該方法儀器精密度良好。
1.2.6重復(fù)性試驗(yàn)取同一產(chǎn)地的樣品5 份,按“1.2.3”項(xiàng)方法制備供試品溶液,按“1.2.1”項(xiàng)條件,分別進(jìn)樣10 μL,測(cè)定重樓皂苷Ⅰ、Ⅱ、Ⅵ、Ⅶ的含量。其含量的RSD分別為1.78、2.00、1.65、2.12%。表明方法重復(fù)性良好。
1.2.7穩(wěn)定性試驗(yàn)取同一供試品溶液,分別于0、2、4、8、12、24 h進(jìn)樣10 μL,測(cè)定峰面積,計(jì)算各成分峰面積的RSD分別為1.98、2.36、2.07、2.14%。表明供試品溶液在24 h內(nèi)穩(wěn)定。
1.2.8回收率試驗(yàn)取已知含量的同一供試品6份,每份0.5 g,精密稱定,分別添加對(duì)照品貯備液1 mL(重樓皂苷Ⅰ、Ⅱ、Ⅵ、Ⅶ分別為0.1058 mg.m l-1、0.0625 mg.m l-1、0.0682 mg.m l-1、0.0578 mg.m l-1),按“1.2.3”項(xiàng)方法制備供試品溶液。按“1.2.1”項(xiàng)條件,分別精密進(jìn)樣10μl,測(cè)得重樓皂苷Ⅰ、Ⅱ、Ⅵ、Ⅶ的平均回收率分別為97.55、96.06、98.08、98.20%;RSD分別為2.88、2.65、2.58、2.76%。表明該方法的準(zhǔn)確度良好。
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