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不同產(chǎn)地連錢草藥材中總黃酮成分含量測定

發(fā)布時間:2019-08-27 來源: 幽默笑話 點擊:


   (1.武漢科技大學(xué)醫(yī)學(xué)院,湖北 武漢 430065;2.武漢大學(xué)藥學(xué)院,湖北 武漢 430072)??
  
  摘 要:目的:建立連錢草藥材中總黃酮成分含量的測定方法。方法:分光光度法。結(jié)果:7個湖北產(chǎn)地連錢草的總黃酮含量平均為64.78mg•g-1,三個混淆品的總黃酮含量平均為34.37mg•g-1?傸S酮含量的不同可在一定程度上區(qū)別連錢草和其混淆品。結(jié)論:連錢草的總黃酮含量與其栽培方式、采收時間密切相關(guān);多數(shù)產(chǎn)地的連錢草與其混淆品相比,總黃酮含量顯著增加,故總黃酮的含量測定可作為連錢草真?zhèn)舞b別的參考依據(jù)。 ?
  關(guān)鍵詞:連錢草;分光光度法;黃酮;含量測定?
  中圖分類號:R284文獻(xiàn)標(biāo)識碼:A文章編號:1673-2197(2009)01-0021-03??
  
  連錢草Herba Glechomae,別名活血丹、銅錢草等,《中國藥典》收載為唇形科植物活血丹Glechoma longituba(Nakai)Kupr的干燥地上部分,具有利濕通淋、清熱解毒、散瘀消腫的功能[1],主治尿路感染、尿路結(jié)石、胃及十二指腸潰瘍、黃疸性肝炎、肝膽結(jié)石等癥,在治療膽結(jié)石、跌打損傷及斷肢再造方面有獨特作用[2-3]。我國連錢草資源極為豐富,除新疆、甘肅、青海、西藏以外其它各省均有連錢草分布[4]。本實驗[5-7]測定了10種不同來源連錢草藥材(7種湖北產(chǎn)地連錢草,3種連錢草的混淆品種)中總黃酮的含量,并進(jìn)行了比較分析,為連錢草藥材的質(zhì)量控制提供了評價依據(jù)。?
  
  1 材料?
  
  1.1 儀器?
  UV-2101PC紫外可見分光光度計(日本島津);CQ250超聲波清洗儀(上海超聲波儀器廠)。?
  1.2 試藥?
  蘆丁對照品(中國藥品生物制品檢定所,批號0080-9705);亞硝酸鈉(分析純,太倉化工二廠,批號20001201);三氯化鋁(分析純,中國金山區(qū)興塔美興化工廠,批號990829);氫氧化鈉(分析純,威爾昆化學(xué)試劑有限公司上海華美藥房經(jīng)銷,批號20020130);連錢草樣品見表1。
  
  
  2 方法?
  
  2.1 對照品溶液的配制?
  精密稱取120℃常壓干燥至恒重的蘆丁對照品0.0110g,置于100mL容量瓶中,用60mL 60%乙醇超聲溶解(容量瓶密塞),放冷,用60%乙醇定容,得到0.11mg•mL-1蘆丁對照品溶液。?
  2.2 供試品溶液的配制?
  精密稱取經(jīng)干燥的連錢草粉末約0.5g,置100mL具塞容器中,精密加60mL 60%乙醇,密塞,稱重,超聲提取30min。放冷,密塞,再稱重,用60%乙醇補(bǔ)足減失的重量,搖勻,過濾,取續(xù)濾液即得供試品溶液。?
  
  3 結(jié)果與討論?
  
  3.1 測定波長的選擇[7]?
  精密稱取蘆丁對照品5mg,置于25mL容量瓶中,加60%乙醇約15mL,超聲使其溶解,放冷,加60%乙醇至刻度,搖勻,得蘆丁標(biāo)準(zhǔn)溶液(0.2mg•mL-1)。精密吸取蘆丁標(biāo)準(zhǔn)溶液8mL,置于25mL容量瓶中,加5%亞硝酸鈉溶液1mL,搖勻,放置6min,加三氯化鋁試液1mL,搖勻,放置6min,再加5%的氫氧化鈉10mL,加水至刻度,搖勻,于波長200~800nm范圍內(nèi)掃描,發(fā)現(xiàn)在510nm處有一最大吸收峰。精密稱取2g連錢草粗粉,置于具塞錐形瓶中,加50mL 60%乙醇,超聲50min,過濾,取續(xù)濾液,不顯色,直接于波長200~800nm范圍內(nèi)掃描;再取續(xù)濾液1mL,照對照品蘆丁一樣顯色后,于波長200~800nm范圍內(nèi)掃描,發(fā)現(xiàn)在504nm處有一最大吸收峰。見圖1。?
  
  3.2 標(biāo)準(zhǔn)曲線?
  精密量取蘆丁對照品溶液1.0、2.0、3.0、4.0、5.0、7.0mL,置于10mL容量瓶中,分別加入60%乙醇使成7mL,精密加入5%亞硝酸鈉0.3mL,搖勻,放置6min;精密加入10%三氯化鋁0.3mL,搖勻,放置6min;加入1mol/L的氫氧化鈉2mL,用60%乙醇定容,搖勻,以不加蘆丁對照品溶液其它同法操作得到的溶液作為空白對照,在504nm處測定吸光度。求得回歸方程為:C(mg•mL-1)=0.075215A+0.001532(r=0.9996,n=6);蘆丁對照品在0.01~0.07mg•mL-1范圍內(nèi)呈良好的線性關(guān)系。?
  3.3 精密度實驗?
  取蘆丁對照品溶液適量,配成高、中、低三個濃度,每個濃度3份,分別顯色后測定吸收度。結(jié)果表明,測定方法的精密度良好(表2)。?
  
  3.4 穩(wěn)定性試驗?
  取對照品溶液3.0mL,進(jìn)行顯色,每隔5min測定一次吸收度,共測定至40min,計算總黃酮的平均含量為0.0297mg•mL-1,RSD=0.96%(n=9),結(jié)果表明顯色后的溶液在40min內(nèi)穩(wěn)定。?
  3.5 重復(fù)性試驗?
  取同一產(chǎn)地(湖北武漢)的連錢草粉末5份,每份約0.5g,精密稱定,按“2.2供試品溶液配制”項下的方法提取。精密量取供試品溶液0.5mL,顯色后測定吸收度,測得總黃酮的平均含量為56.67mg•g-1,RSD=0.68%(n=5),結(jié)果表明該方法重復(fù)性良好。?
  3.6 加樣回收率試驗?
  取3批已知總黃酮含量的連錢草粉末(恩施)約0.1g,加入蘆丁對照品適量,精密稱定,按“2.2供試品溶液配制” 項下的方法提取。精密量取供試品溶液1mL,按“3.2”項下方法測定總黃酮的含量,結(jié)果見表3。實驗結(jié)果表明,該測定方法準(zhǔn)確性高。?
  
  3.7 不同產(chǎn)地連錢草中總黃酮含量測定?
  取不同產(chǎn)地的連錢草約5g,按“2.2供試品溶液配制”項下的方法提取。精密吸取供試品溶液0.5mL,按“3.2”項下方法測定不同產(chǎn)地連錢草中總黃酮的含量,結(jié)果見表4。?
  
  從表4可知,除荊州2外,湖北產(chǎn)地連錢草的總黃酮含量均高于連錢草混淆品種的總黃酮含量;7個湖北產(chǎn)地連錢草的總黃酮含量平均為64.78mg•g-1,三個混淆品的總黃酮含量平均為34.37mg•g-1?傸S酮含量的不同可在一定程度上區(qū)別連錢草和其混淆品。?
  兩種湖北荊州連錢草的產(chǎn)地相同,栽培方式和采收時間不同(家種,5月;野生,8月),但在7個湖北產(chǎn)地連錢草中,荊州1(92.85mg•g-1)總黃酮含量最高,而荊州2(36.35mg•g-1)最低。兩個采收時間不同(5月,9月)的湖北恩施野生連錢草中總黃酮含量也有較大差異。除武漢和丹江產(chǎn)地連錢草的總黃酮含量比較接近外,其它湖北產(chǎn)地連錢草的總黃酮含量都有一定差異。這說明栽培方式、采收時間和湖北省內(nèi)不同地區(qū)的生長環(huán)境均影響連錢草的總黃酮含量。?
  
  4 結(jié)論?
  
  七種湖北產(chǎn)地連錢草的總黃酮含量差異較大。連錢草的總黃酮含量不僅與栽培方式、采收時間密切相關(guān),而且湖北省內(nèi)不同地區(qū)的生長環(huán)境對連錢草的總黃酮含量也有影響。 因此在選用連錢草時一定要注意具體產(chǎn)地和用量,以確保療效;同時要合理栽培、采收連錢草。多數(shù)產(chǎn)地的連錢草與其混淆品相比,總黃酮含量顯著增加,故總黃酮的含量測定可作為連錢草真?zhèn)舞b別的參考依據(jù),對保證其藥材質(zhì)量、指導(dǎo)其栽培生產(chǎn),以及相關(guān)制劑產(chǎn)品的質(zhì)量控制具有重要意義和應(yīng)用價值。?
  
  參考文獻(xiàn):?
 。1] 國家藥典委員會.中國藥典(一部)[M].北京:化學(xué)工業(yè)出版社,2005:117.?
 。2] 曾細(xì)生.用連錢草斷指(肢)再植30例[J].中國中醫(yī)藥科技,2004,11(2):125.?
 。3] 曹萍,褚小蘭,范崔生.金錢草類中藥的研究概論[J].江西醫(yī)學(xué)院學(xué)報,2005,45(1):110-113.?
 。4] 宋•唐慎微.證類本草[M].北京:華夏出版社,1993:265.?
  [5] 祝德秋,羅啟劍,崔嵐.分光光度法測定連錢草中熊果酸的含量[J].藥學(xué)服務(wù)與研究,2003,3(4):268-269.?
 。6] 王慶,段金慶,錢大瑋.不同產(chǎn)地連錢草中三菇酸類及黃酮類成分的分析與評價[J].南京中醫(yī)藥大學(xué)學(xué)報,2006,2(1):44-46.?
 。7] 祝德秋,羅啟劍,崔嵐.連錢草中總黃酮的含量測定[J].藥學(xué)服務(wù)與研究,2003,3(1):62-63.(責(zé)任編輯:姜付平)

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