摘要 目的：研究四川道地產(chǎn)區(qū)6種烏頭生物堿在不同部位的分布差異，比較母根、子根基于化學(xué)成分的區(qū)別。方法：采用超高效液相色譜法（UPLC）測(cè)定19批四川道地烏頭藥材母根、子根、須根中6種烏頭生物堿含量，并結(jié)合SPSS統(tǒng)計(jì)軟件對(duì)數(shù)據(jù)進(jìn)行顯著性差異、聚類分析和主成分分析研究。結(jié)果：6種烏頭生物堿在3個(gè)部位的分布差異各不相同。母根、子根中苯甲酰新烏頭堿、新烏頭堿含量有顯著性差異，為兩者的差異性指標(biāo)成分。聚類分析、主成分分析也將供試樣品分成母根、子根兩大類。結(jié)論：母根、子根的物質(zhì)基礎(chǔ)有差別，可為臨床正確使用提供參考。
　　關(guān)鍵詞 UPLC；烏頭；母根；子根；烏頭生物堿；區(qū)別
　　收稿日期 2013-03-15
　　[基金項(xiàng)目] 國家“重大新藥創(chuàng)制”科技重大專項(xiàng)（2013zx09402202）
　　通信作者 *馮鋒，教授，E-mail：fengsunlight@163.com
　　作者簡(jiǎn)介 錢長敏，碩士研究生，主要從事藥材資源的研究，Tel：15902245166，E-mail：qianchangmin@126.com 毛茛科植物烏頭Aconitum carmichaelii Debx.為一常用毒性藥用植物。藥典收錄的相關(guān)藥材有川烏和附子。兩者分別為烏頭的母根和子根[1]。雖然藥典已明確了藥用部位，但川烏和附子的混用還是較多。課題組在終端藥材市場(chǎng)采購時(shí)發(fā)現(xiàn)川烏除有母根之外，許多為小子根，附子的生藥材多為大個(gè)子根，這與之前文獻(xiàn)報(bào)道一致[2]。近年來，已有針對(duì)烏頭不同組織的多項(xiàng)研究，包括毒性、化學(xué)成分的比較等[3-7]。其中烏頭生物堿研究較多，主要比較了總生物堿和3種雙酯型生物堿的差別，但未見有單酯型生物堿的含量差異研究。四川江油為烏頭藥材的道地產(chǎn)區(qū)，有著悠久的種植歷史，其年產(chǎn)量占了全國烏頭藥材很大的比重。本文建立了超高效液相色譜法（UPLC）測(cè)定江油多批次烏頭樣本母根、子根、須根中6種烏頭生物堿含量，比較研究江油6種烏頭生物堿在不同根部的分布差異，同時(shí)結(jié)合聚類分析（HCA）和主成分分析（PCA），系統(tǒng)探討母根與子根基于6種烏頭生物堿的區(qū)別，以期通過多樣本量多化學(xué)成分來評(píng)價(jià)四川道地產(chǎn)區(qū)藥材質(zhì)量和根部組織的差異，為已有化學(xué)成分研究提供補(bǔ)充，為母根、子根在臨床的正確合理使用提供更多的參考依據(jù)。
　　1 材料
　　1.1 儀器
　　超高效液相色譜系統(tǒng)（ ACQUITY UPLC，美國Waters公司，包括二元梯度泵、真空脫氣機(jī)、自動(dòng)進(jìn)樣器、柱溫箱、TUV檢測(cè)器、Empower2工作站），電子天平（XS205，瑞士METTLER TOLEDO公司），粉碎機(jī)（MF10，德國IKA公司），高速冷凍離心機(jī)（ST16R，美國Thermo公司），平行溶劑蒸發(fā)儀（Q-101，瑞士BUICH公司），Milli-Q超純水系統(tǒng)（美國Millipore公司）。
　　1.2 藥品與試劑
　　苯甲酰新烏頭堿、苯甲酰烏頭堿、苯甲酰次烏頭堿、新烏頭堿、烏頭堿、次烏頭堿（純度和批號(hào)分別為99.6%，111795-200901；96.5%，111794-201102；99.5%，111796-200901；100%，110799-200505；100%，110720-200410；99.5%，110798-200805；均購于中國食品藥品檢定研究院）；乙腈、甲醇（色譜純，德國Merck公司）；醋酸銨（優(yōu)級(jí)純，天津市光復(fù)科技發(fā)展有限公司）；碳酸氫銨（優(yōu)級(jí)純，天津市元力化工有限公司）；醋酸（色譜純，天津市康科德科技有限公司）；異丙醇、醋酸乙酯（分析純，天津市化學(xué)試劑二廠）；氨水（分析純，天津市化學(xué)試劑三廠）；超純水（Milli-Q制備）。
　　1.3 藥材樣本采收
　　烏頭藥材樣本于2012年6月底（產(chǎn)區(qū)采收季）實(shí)地采自道地產(chǎn)區(qū)四川江油，在當(dāng)?shù)夭煌�種植區(qū)域共收集19批樣本，主要為根部及與根部相連少部分莖葉。除去泥沙，曬干，將根部分為母根、子根、須根，備用。19批藥材樣本經(jīng)天津大學(xué)藥物科學(xué)與技術(shù)學(xué)院高文遠(yuǎn)教授鑒定，均為毛茛科植物烏頭A. carmichaelii，樣品標(biāo)本保存于天津天士力集團(tuán)研究院現(xiàn)代中藥研究所，樣本信息見表1。
　　表1 19批烏頭藥材樣本信息
　　Table 1 The sources of 19 batches of Aconitum carmichaelii
　　注：每個(gè)樣本均含有母根、子根、須根。
　　2 方法
　　2.1 對(duì)照品溶液的制備
　　取苯甲酰新烏頭堿、苯甲酰烏頭堿、苯甲酰次烏頭堿、新烏頭堿、烏頭堿、次烏頭堿對(duì)照品適量，精密稱定，加0.1% 醋酸甲醇至刻度，搖勻，制成質(zhì)量濃度分別為372.8，61.2，130，602.4，70.4，1 102.4 mg·L^-1的混合對(duì)照品儲(chǔ)備液，存儲(chǔ)于4 ℃冰箱中備用。
　　2.2 供試品溶液的制備
　　分別取各樣品粉末（過3號(hào)篩）2 g，精密稱定，置具塞錐形瓶中，加氨試液3 mL，精密加入異丙醇-醋酸乙酯（1∶1）混合溶液50 mL，密塞，稱定質(zhì)量，超聲處理（功率300 W，頻率40 kHz，水溫在25 ℃以下）30 min，放冷，再稱重，用異丙醇-醋酸乙酯（1∶1）混合溶液補(bǔ)足失重，搖勻，濾過，精密量取續(xù)濾液25 mL，40 ℃以下減壓回收溶劑至干，殘?jiān)�精密加�?.1% 醋酸甲醇溶液3 mL溶解，轉(zhuǎn)移至離心管中，于12 000 r·min^-1下高速離心10 min，取上清液，即得。
　　2.3 超高效液相色譜條件
　　ACQUITY UPLC BEH C₁₈色譜柱（2.1 mm×100 mm，1.7 μm）；流動(dòng)相A 30 mmol·L^-1 NH₄AC水溶液（氨水調(diào)pH 10.0），流動(dòng)相B 乙腈；洗脫梯度：0～1.5 min，28%乙腈，1.5～2.8 min，28%～38%乙腈，2.8～5.5 min，38%乙腈，5.5～7.0 min，38%～60%乙腈，7.0～10 min，60%～28%乙腈；檢測(cè)波長235 nm；柱溫40 ℃；進(jìn)樣量2 μL；對(duì)照品及樣本（包括母根、子根、須根）的UPLC圖見圖1。

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