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道地藥材建青黛組織培養(yǎng)技術(shù)研究

發(fā)布時(shí)間:2019-08-29 來(lái)源: 幽默笑話 點(diǎn)擊:

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  摘要 以建青黛頂芽為外植體,MS為基本培養(yǎng)基,研究不同激素組合的培養(yǎng)基對(duì)頂芽誘導(dǎo)、增殖及生根的影響。試驗(yàn)結(jié)果表明:最佳頂芽誘導(dǎo)培養(yǎng)基為MS+6-BA 1.0 mg/L+NAA 0.1 mg/L,最佳增殖培養(yǎng)基為MS+6-BA 1.0 mg/L+IBA 0.1 mg/L,最佳生根培養(yǎng)基為MS+6-BA 0.2 mg/L+NAA 0.05 mg/L+IBA 0.05 mg/L。
  關(guān)鍵詞 道地藥材;建青黛;組織培養(yǎng);頂芽
  中圖分類號(hào) S567.9 文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼 A 文章編號(hào) 1007-5739(2016)09-0070-01
  青黛味淡、性寒,具清熱解毒、涼血止血、定驚之功效,臨床常用于時(shí)病熱毒,發(fā)癍吐血、胸痛咯血。近年來(lái),研究發(fā)現(xiàn)青黛的主要成分之一的靛玉紅對(duì)白血病有一定的療效,從而引起了國(guó)內(nèi)外的極大關(guān)注[1]。青黛作為一種傳統(tǒng)中藥材,主產(chǎn)于福建、河南、河北、江蘇和四川等地,其中福建產(chǎn)的品質(zhì)最佳,稱之為建青黛,為公認(rèn)的名優(yōu)道地藥材。建青黛含靛藍(lán)最高可達(dá)3.5%,含靛玉紅最高可達(dá)0.35%,高于藥典的要求(含靛藍(lán)不低于2.0%,含靛玉紅不低于0.13%)。目前福建唯仙游縣書峰鄉(xiāng)有生產(chǎn),傳統(tǒng)的繁殖方法為扦插繁殖,而常年無(wú)性繁殖會(huì)導(dǎo)致種源退化。植物組織培養(yǎng)具有繁殖系數(shù)大、脫病毒復(fù)壯等優(yōu)點(diǎn)[2-5],然而組織培養(yǎng)方法應(yīng)用在青黛上卻未見報(bào)道。本研究以青黛頂芽為外植體,建立青黛種苗工廠化生產(chǎn)的完整體系,為大量推廣優(yōu)質(zhì)福建道地青黛種苗及建青黛種質(zhì)資源保護(hù)奠定基礎(chǔ)。
  1 材料與方法
  1.1 供試材料
  供試材料為福建省道地青黛,摘取幼嫩的頂芽和側(cè)芽為外植體。
  1.2 培養(yǎng)條件
  本試驗(yàn)采用的誘導(dǎo)、增殖培養(yǎng)基本培養(yǎng)基為MS培養(yǎng)基,生根培養(yǎng)基本培養(yǎng)基為1/2MS(大量元素減半)培養(yǎng)基,附加不同濃度的6-BA、NAA、IBA(單位:mg/L,下同);九囵B(yǎng)基中,蔗糖為3%,瓊脂為0.7%,pH值為5.8~6.0。培養(yǎng)條件為(25±2)℃,每天光照12 h,光照強(qiáng)度為2 000~2 500 lx。
  1.3 試驗(yàn)方法
  選擇健康的無(wú)病斑的頂芽,用流水沖洗2 h,用洗衣粉浸泡10 min,用刷子輕刷,然后用自來(lái)水沖洗干凈。在超凈工作臺(tái)上用75%的酒精浸泡30 s,再用0.1%的升汞消毒8 min,無(wú)菌水沖洗4次后,接種在誘導(dǎo)培養(yǎng)基上。當(dāng)青黛組培苗長(zhǎng)至高約2.5 cm時(shí)切下接入8種生根培養(yǎng)基中,每瓶5株,每個(gè)處理10瓶。
  2 結(jié)果與分析
  2.1 不同激素組合對(duì)建青黛頂芽初代誘導(dǎo)的影響
  建青黛頂芽接種15 d后,基部切口處開始膨大,隨后慢慢出現(xiàn)許多綠色的小芽點(diǎn),30 d左右開始分化出不定芽。
  從表1可以看出,當(dāng)NAA濃度不變時(shí),隨著6-BA濃度的增加,誘導(dǎo)率呈增加趨勢(shì);但當(dāng)6-BA濃度為1.50 mg/L時(shí),誘導(dǎo)出的苗有輕微的玻璃化;當(dāng)6-BA濃度為2.00 mg/L時(shí),誘導(dǎo)出的苗會(huì)玻璃化。當(dāng)6-BA濃度都為1.00 mg/L時(shí),隨著NAA濃度(0.05~0.50 mg/L)的升高,誘導(dǎo)率呈先上升后下降的趨勢(shì)。在NAA濃度為0.10 mg/L時(shí),外植體的誘導(dǎo)率達(dá)到最高即93.33%,且苗長(zhǎng)勢(shì)正常;而NAA濃度超過(guò)0.10 mg/L時(shí),隨著NAA濃度的增加,誘導(dǎo)率卻降低。
  2.2 不同激素組合對(duì)建青黛增殖的影響
  從表2可以看出,在6-BA濃度為0.8 mg/L或1.0 mg/L時(shí),培養(yǎng)基中生長(zhǎng)的苗葉色正常,未見玻璃化現(xiàn)象,而當(dāng)培養(yǎng)基中6-BA濃度為1.2 mg/L時(shí),IBA 3個(gè)不同濃度的培養(yǎng)基中生長(zhǎng)的苗都表現(xiàn)為葉色較淡、有輕微玻璃化現(xiàn)象。當(dāng)6-BA濃度為0.8、1.0或1.2 mg/L時(shí),IBA濃度都是為0.1 mg/L時(shí)增殖倍數(shù)最高。從苗的質(zhì)量和增殖倍數(shù)2個(gè)方面考慮,認(rèn)為MS+6-BA 1.0 mg/L+IBA 0.1 mg/L培養(yǎng)基作為繼代增殖培養(yǎng)基較好。
  2.3 不同激素組合對(duì)建青黛生根的影響
  當(dāng)建青黛組培苗長(zhǎng)至高2~3 cm時(shí)切下接入生根培養(yǎng)基中。培養(yǎng)15 d后,根尖開始冒出。培養(yǎng)25 d時(shí),組培苗的生根情況見表3。從表3可以看出,8種培養(yǎng)基都能促進(jìn)生根,最佳的建青黛生根培養(yǎng)基為6-BA 0.2 mg/L+NAA 0.05 mg/L+IBA 0.05 mg/L,生根率可達(dá)100%。
  2.4 煉苗與移栽
  將已長(zhǎng)根的組培苗小心地從培養(yǎng)瓶中取出,輕輕洗掉根部培養(yǎng)基,用多菌靈或甲基托布津浸泡30 min后,移栽到泥炭土∶珍珠巖體積比為3∶1的穴盤中,放入蓋有薄膜和遮陽(yáng)網(wǎng)的大棚中管理。棚內(nèi)保持溫度20~25 ℃,相對(duì)濕度 70%~80%,成活率可達(dá)95%以上。煉苗30 d左右,當(dāng)幼苗長(zhǎng)至7~10 cm即可移栽到大田中,一般選擇春、秋季進(jìn)行煉苗與移栽。
  3 結(jié)論與討論
  試驗(yàn)通過(guò)建青黛頂芽誘導(dǎo)、增殖、生根等培養(yǎng),建立了建青黛工廠化快速繁殖體系,解決了青黛種源退化的問題。張利英等[6]用草莓組培苗和自繁苗進(jìn)行比較,結(jié)果表明:草莓組培苗在植物學(xué)性狀、果實(shí)性狀、豐產(chǎn)性及抗病性等方面均優(yōu)于自繁苗,其中產(chǎn)量可比自繁苗增產(chǎn)30%以上。而建青黛為多年生草本植物,扦插繁殖每年收獲產(chǎn)量不一樣,一般3年扦插1次。組培苗種植后的生長(zhǎng)勢(shì)與扦插苗的比較、每年的產(chǎn)量、一次種植可維持高產(chǎn)量幾年等問題還有待研究。
  4 參考文獻(xiàn)
  [1] 國(guó)家藥典委員會(huì).中國(guó)藥典(一部)[S].北京:中國(guó)醫(yī)藥科技出版社,2010:185.
  [2] 謝利娟,韓蕾,錢永強(qiáng).爆仗竹組培快繁6-BA與NAA組合濃度配比優(yōu)化分析[J].核農(nóng)學(xué)報(bào),2005,19(3):181-185.
  [3] 王小敏,梁呈元,李維林.留蘭香組織培養(yǎng)及快速繁殖條件的優(yōu)化[J].植物資源與環(huán)境學(xué)報(bào),2007,16(4):38-40.
  [4] 林江波,戴藝民,鄒暉,等.福建鐵皮石斛人工繁育技術(shù)研究[J].福建農(nóng)業(yè)學(xué)報(bào),2010,25(5):606-609.
  [5] 肖哲麗,柳金風(fēng).植物組織培養(yǎng)的研究進(jìn)展及新技術(shù)應(yīng)用[J].寧夏農(nóng)林科技,2011,52(1):13-14.
  [6] 張利英,李賀年,張?chǎng),?草莓組培苗和自繁苗田間性狀比較試驗(yàn)研究[J].安徽農(nóng)業(yè)科學(xué),2009,37(25):11957-11958.

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